Cromatografo

Cromatógrafo de Líquidos

El equipo de cromatografía de líquidos de alta resolución Varian ProStar 215, consta de dos bombas para operación por gradiente, una válvula de inyección Rheodyne modelo 7125, un detector ultravioleta/visible con longitud de onda fija modelo Pro Star 320 y un detector de índice de refracción con control de temperatura modelo Pro Star 350, usandocomo graficador el programa Star Varian Cromatography Workstation System Control Versión 5.50
instalado en un computador personal.

CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN

Aplicaciones principales: Técnica de separación para los materiales menos volátiles e
iónicos; análisis cuantitativo de multicomponentes.
Fenómeno molecular: Reparto entre una solución líquida y un substratoVentajas en el análisis cualitativo: Separa materiales para su examen por medio de
otras técnicas.
Ventajas en el análisis cuantitativo: Aplicación amplia a los materiales menos
volátiles, análisis de multicomponentes.
Muestra promedio deseable: 10 mg
Limitaciones del método: Se tarda en desarrollar el método
Limitaciones para la muestra: Ninguna
TIPOS DE CROMATOGRAFÍA HPLC
Tipos básicos decromatografía en los que la fase móvil es un líquido: (1) cromatografía de reparto; (2) cromatografía de adsorción, o líquido-sólido; (3) cromatografía iónica; y (4) cromatografía de exclusión por tamaños, o en geles.

INSTRUMENTACIÓN PARA CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS
Sistemas para el tratamiento de los disolventes Sistemas de bombeo

Tipos de bombas. Se utilizan tres tipos de bombas, cada una consus propias ventajas y
desventajas: bombas recíprocas, bombas de jeringa o de desplazamiento y bombas
neumáticas o de presión constante.
Amortiguadores de pulsos: Los amortiguadores electrónicos de pulsos proporcionan una carrera hacia delante corta y rápida del pistón, y enseguida la carrera rápida de recarga de la bomba. El pequeño impulso hacia delante amortigua el pulso de flujo llevandodisolvente a la presión del sistema.

Control del caudal y sistemas de programación: permiten medir el caudal mediante la determinación de la caída de presión a través de un restrictor colocado en la salida de la bomba. Cualquier diferencia entre la señal y un valor preestablecido se utiliza para aumentar o disminuir la velocidad del motor de la bomba.

Sistemas de inyección de muestra
Columnasanalíticas: Las columnas para cromatografía de líquidos se construyen de ordinario con tubo de acero inoxidable de diámetro interno uniforme tienen una longitud entre 5 y 30 cm. Por lo común, las columnas son rectas y se pueden alargar, si es necesario, acoplando dos o más columnas. El diámetro interno de las columnas es a menudo de 4 a 10 mm y los tamaños de las partículas de los rellenos máscomunes son 3, 5 y 10 μm.

Precolumnas: para aumentar la vida de la columna analítica, se coloca delante una precolumna que elimina la materia en suspensión y los contaminantes de los disolventes.

Tipos de rellenos de la columna: En cromatografía de líquidos se han utilizado dos tipos básicos de rellenos, pelicular y de partícula porosa. El primero consiste en bolas de vidrio o de polímero, noporosas y esféricas con unos diámetros característicos de 30 a 40 μm. En la superficie de estas bolas se deposita una capa delgada y porosa de sílice, alúmina o de una resina de intercambio iónico. Los típicos rellenos de partículas porosas de cromatografía de líquidos están formados por micropartículas porosas con diámetros entre 3 y 10 μm y con la menor dispersión posible para un tamañodeterminado.

Termostatos: se necesita un control de la temperatura, y las columnas trabajan a temperatura ambiente. Sin embargo, muchas veces si se controla la temperatura de la columna en unas pocas décimas de grado centígrado, se obtienen mejores cromatogramas los instrumentos comerciales llevan actualmente hornos para las columnas que controlan la temperatura de la columna a las décimas de grado,...