cromatografía de líquidos


Objetivos.
Integra los elementos estructurales de un cromatógrafo de líquidos, traslada los conocimientos adquiridos de los parámetros cromatográficos y utiliza la información para el análisis cualitativo y cuantitativo para una muestra real.
Interpreta los resultados obtenidos a partir de parámetros de calidad de mediciones.
F) resumen de la investigación teórica:

1.- ¿Qué es laCromatografía de líquidos de alta eficacia (CLAR o HPLC)?
Es la técnica analítica de separación más ampliamente utilizada, por su sensibilidad, su fácil adaptación a las determinaciones cuantitativas exactas, su idoneidad para la separación de especies no volátiles o termolábiles y, sobre todo, su gran aplicabilidad a sustancias que son de primordial interés en la industria, en muchos campos de laciencia y para la sociedad en general.
La cromatografia de líquidos de alta eficacia se encuentra dentro de la cromatografía de elución. En esta, un líquido (fase móvil) circula en contacto con un sólido u otro líquido inmiscible (fase estacionaria); al introducir una mezcla de sustancias (analitos) en la corriente de fase móvil, cada analito avanzará a lo largo del sistema con una velocidaddiferente que dependerá de su afinidad por cada una de las fases. Esto supone que despues de terminado el recorrido de la muestra por la columna, cada una de las sustancias introducidas en el sistema eluirá con un tiempo diferente, es decir, estarán separadas.

2.- Para establecer el método en Cromatografía de Reparto, ¿cuáles son las distintas propiedades y funciones de la fase móvil en laCromatografía de Gases y en la Cromatografía de Líquidos? Y ¿cómo influyen esas características en los dos métodos (Cromatografía de Gases y HPLC)?
La magnitud de los efectos cinéticos sobre la eficacia de la columna depende claramente de tiempo de contacto entre la fase móvil y la fase estacionaria, el cual a su vez depende del caudal de la fase móvil. Por esta razón, los estudios de eficaciageneralmente se han realizado determinando “H”, en función de la velocidad de la fase móvil. Los datos obtenidos de estos estudios se representan en dos gráficas, una para comatografía de líquidos y otra para cromatografía de gases. En ambos casos H pasa por un valor mínimo (o un máximo de eficacia) a bajos caudales. Los mínimos para la cromatografía de líquidos generalmente se dan con caudales bastantemenores que para cromatografía de gases y a menudo son tan bajos que en las condiciones de trabajo habituales no llegan a observarse. A esta gráfica se le denomina frecuentemente Representación gráfica de la ecuación de Van Deemter.

3.- En cromatografía de reparto, cuáles son las características de las columnas para:
a) Rellenos de fase normal.- Fases estacionarias de elevada polaridad como elagua o el trietilenglicol soportadas sobre partículas de sílice o alúmina, como fase móvil se emplea un disolvente relativamente apolar como el hexano o el iso-propileter. Los rellenos de fase unida químicamente se clasifican como de fase normal cuando el recubrimiento contiene grupos funcionales polares.
b) Rellenos de fase inversa.- los componentes más polares aparecen primero, y un aumento de lapolaridad de la fase móvil aumenta el tiempo de elución. Los rellenos de fase unida químicamente se clasifican como de fase inversa cuando el recubrimiento enlazado tiene un carácter no polar.

4.- a) ¿Qué es elución isocrática?
Se lleva a cabo con un solo disolvente o con una mezcla de disolventes, constante, en el tiempo de análisis.
b) ¿Qué es elución con gradiente?
Se lleva a cabovariando de forma continua la composición de los disolventes de forma que su fuerza vaya incrementando durante el tiempo de análisis. Normalmente se procede de esta forma, utilizando una fuerza de fase móvil más débil al principio para ir incrementándola después. Existen dos tipos de gradientes: Lineales (curva 5). La velocidad de cambio del disolvente fuerte es lineal en el tiempo.
Exponenciales,...