Cromatografía en capa fina de carbohidratos

UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSE DE CALDAS
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA GUIA Nº 6
DETERMINACIÓN DE MONOSACÁRIDOS Y DISACÁRIDOS UTILIZANDO CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

RESUMEN

Mediante la técnica de cromatografía en capa fina para separación de mezclas e identificación de sustancias se encontró que la muestra biológica (orina) contenía arabinosa caracterizada con un valor de Rf = 0.486siendo medianamente polar respecto a los demás carbohidratos comparados. Mientras que la muestra de fruta analizada (uva chilena roja) contenía glucosa y fructosa identificadas mediante su Rf 0.5 y 0.48 respectivamente y el color que presentaron luego del proceso de revelado, la identificación de los carbohidratos para esta muestra no fue completa, debido a las inconsistencias en el sembrado y en elrevelado principalmente.

INTRODUCCION

La cromatografía es una técnica mediante la cual los componentes de una mezcla, se separan según las distintas velocidades con que se desplazan a través de una fase estacionaria cuando son transportados por una fase móvil [1], tal separacion se debe a la interaccion entre las fuerzas presentes, las cuales pueden ser de tipo físico ó químico. Por su parte,las fuerzas de tipo físico ocurren por la atracción de las sustancias por separar y la superficie del sólido (fase estacionaria); estas atracciones se dan por medio de fuerzas de Van der Waals, por propiedades magnéticas ó generación de campos eléctricos. En cuanto a las fuerzas de tipo químico, se pueden generar enlaces por puentes de hidrógeno entre la especie que constituye la fase móvil yaquella que corresponde con la fase estacionaria.

Para la consecución de una cromatografía exitosa es necesario tener en cuenta aspectos como el equilibrio adecuado entre las fuerzas intermoleculares existentes entre las sustancias involucradas como lo son soluto, fase móvil y fase estacionaria; fuerzas que han sido cuantificadas por medio de la polaridad relativa. Sin embargo, según el tipo decromatografía se encuentran algunos factores que influyen en la separación, así para aquellas basadas en el intercambio iónico la separación depende de la selectividad de las resinas, el pH, el tiempo de contacto y el tamaño de los iones entre otros. Para las cromatografías de adsorción existen factores como el peso molecular, el tiempo de retención, naturaleza del adsorbente y adsorbato, laelección y composición de la fase móvil y estacionaria y la polaridad del analito; para las cromatografías de reparto es importante tener en cuenta la temperatura, las cantidades de solvente y soluto, los coeficientes de reparto de líquidos de la fase móvil y de la fase estacionaria y los empaquetados principalmente; en cuanto a la cromatografía de filtración en gel los principales factores de influenciason el tamaño de las partículas y el tipo de empaquetado. Por otra parte, en la cromatografía de gas-liquido y de gas-solido los factores influyentes son similares, en ambos casos se debe atender a la naturaleza de la fase estacionaria, la sensibilidad térmica de esta, el peso molecular de las especies de la muestra, la polaridad de esta, la inyección de la muestra y la temperatura de la columna(las dos últimas en el caso particular de la cromatografía gas-liquido). En el caso de la cromatografía en papel la capilaridad, capacidad de adsorción del papel las interferencias se presentan debido a la pureza del solvente, la cantidad de muestra aplicada, la aplicadores de la muestra, la selección del sistema cromatográfico, la preparación de la muestra, la aplicación de la muestra y Reveladorealizado son los principales influyentes para este tipo. En lo referente a la cromatografía en capa fina, en la que se centra nuestro interés, se consideran como factores que pueden afectar el proceso los descritos a continuación los adsorbentes: los cuales presentan propiedades como el tamaño de sus partículas, contienen adhesivos, aditivos, los eluyentes: deben ser puros, conservados en...