Cromatografía

Cromatografía en columna

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
OBJETIVOS
a) Conocer la técnica de cromatografía en columna, sus características y los
factores que en ella intervienen.
b) Utilizar la cromatografía en columna para la separación de mezclas de
compuestos orgánicos.
c) Controlar por cromatografía en capa fina la separación de una mezcla de
compuestos por cromatografía en columna.ANTECEDENTES
a) Cromatografía en columna y capa fina. Características y aplicaciones.
b) Cromatografía de adsorción y de partición o reparto.
c) Selección de eluyentes para la separación de compuestos por cromatografía
en columna.
d) Técnicas de separación cromatográfica por elución, por adsorción y por
desplazamiento.
e) Eluyentes y adsorbentes para cromatografía en columna y capa fina. Factoresque influyen en la separación por cromatografía en columna.
INFORMACION
a) La cromatografía en capa fina es una técnica para determinar el número de
componentes de una mezcla y como una prueba preliminar para realizar una
cromatografía en columna, entre otros.
b) El proceso de cromatografía en columna se controla por cromatografía en capa
fina, de tal manera que se puede separar cadacomponente de la mezcla.
c) La cromatografía en columna se usa para separar grandes cantidades de
material: >100 mg. El proceso de cromatografía consta de una fase móvil
(eluyente) y una fase estacionaria (adsorbente), los cuales dependen de las
sustancias.

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DESARROLLO EXPERIMENTAL
MATERIAL POR EQUIPO DE 2 ALUMNOS
Frascos viales de 15 mLVaso precipitado de 150 mL
Espátula
Frasco p/cromatografía c/tapa
Capilares
Piseta de 125 mL
Agitador de vidrio
Placas para cromatografía
Pinzas 3 dedos c/nuez
Columna para cromatografía
Varilla de vidrio de 50 cm
Embudo de vidrio
Probeta graduada de 25 mL
Lámpara de luz ultravioleta

(10)
(2)
(1)
(3)
(5)
(1)
(1)
(8)
(1)
(1)
(1)
(1)
(1)
(1)

SUSTANCIAS Y REACTIVOSSilica gel o alumina para columna (de acuerdo al experimento a realizar)
Sílica gel para cromatografía en capa fina.
Acetato de etilo
Hexano.
Antraceno grado técnico
Colorante comercial de alimentos
PROCEDIMIENTO
SE REALIZARÁ EL EXPERIMENTO QUE EL PROFESOR INDIQUE
EXPERIMENTO 1. PURIFICACIÓN DE ÁCIDO BENZOICO
Se le proporcionará 0.5 g de una mezcla sólida de ácido benzoico contaminado conazul
de metileno, los cuales se separan por cromatografía en columna. Para empacar la
columna sujétela en el soporte con las pinzas. Engrase ligeramente la llave y mantenga
la posición de cerrado. Introduzca hasta el fondo un pequeño pedazo de algodón
ayudándose con la varilla de vidrio, agregue 10 mL de eluyente (nota 1) y presione
suavemente el algodón para que quede bien colocado y sinburbujas (nota 2).
Prepare una suspensión de 10 g de Sílicagel para columna en 50 mL de eluyente y agite
por 5 min. hasta eliminar las burbujas de aire. A través del embudo de vidrio vierta la
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suspensión en la columna golpeando ligeramente con los dedos para que el empacado
sea uniforme (Figura 1).
Abra la llave para eliminar el exceso dedisolvente teniendo cuidado de no dejar la sílica
gel sin disolvente (nota 3). En un vaso de precipitado de 150 mL disuelva la mezcla
problema con la mínima cantidad de eluyente (5 mL), ayudándose con el agitador,
viértala con cuidado para que quede distribuida uniformemente encima de la superficie
de sílica gel. Abra la llave para colectar el disolvente y se adsorba la muestra aplicada(cuidando que no se seque la columna), eluya la muestra.

Figura 1. Preparación de la columna para cromatografía
Colecte fracciones de 8 mL en los frascos viales y verifique la separación haciendo
cromatoplacas (nota 4 y 5) de cada una de las fracciones usando una muestra testigo

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como se indica en la figura. Eluya las cromatoplacas en...