Cromatogrficos 6700

Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Química
Química Analítica Instrumental II

Técnicas Cromatográficas

Diciembre de 2007

Introducción a los métodos de separación

Capítulo 1.
Introducción a los métodos de separación
1.1 Introducción a la cromatografía
En 1906, el botánico Ruso M. Tswett realizó un experimento que condujo al descubrimiento de lo
que hoy conocemos comocromatografía. Colocó un extracto de pigmentos vegetales en la parte
superior de una columna de vidrio rellena de carbonato de calcio (CaCO3). Al agregar éter, observó que la
mezcla original se separaba en diversas bandas coloridas que descendían a través de la columna a
diferentes velocidades.
Un rasgo característico de la cromatografía es la presencia de dos fases; dispuestas de tal manera
que mientrasuna permanece estacionaria dentro del sistema (fase estacionaria), la otra se desplaza a lo
largo de él (fase móvil). La clave de la separación en cromatografía es que la velocidad con la que se
mueve cada sustancia depende de su afinidad relativa por ambas fases (equilibrio de distribución). En el
experimento de Tswett, la separación de los pigmentos vegetales se logró gracias a que cada uno deellos tenía una afinidad diferente por las fases. En general, los componentes más afines a la fase
estacionaria avanzan lentamente (más retenidos) mientras que los más afines a la fase móvil (menos
retenidos) se mueven con mayor rapidez. Por consecuencia, el medio cromatográfico (columna, placa o
papel) funciona como un controlador de la velocidad de cada sustancia que constituye la mezcla,logrando así su separación y mediante el uso de un detector, su caracterización química.
Aunque los principios fundamentales son los mismos, se acostumbra clasificar los métodos
cromatográficos según el estado físico de la fase móvil:
Cromatografía líquida. La fase móvil es un disolvente o mezcla de disolventes y la fase estacionaria un
sólido que interactúa con las sustancias que se desea separar(cromatografía líquido-sólido), o bien un
líquido inmiscible con la fase móvil, depositado en la superficie de un sólido (cromatografía líquidolíquido). Esta forma de cromatografía puede realizarse con diferentes arreglos experimentales: en
columna, en capa delgada o en papel. En el primer caso, la fase estacionaria se encuentra rellenando un
tubo; en el segundo, se dispersa sobre una lámina de vidrio oaluminio formando un lecho de espesor
uniforme; en la cromatografía en papel, la fase estacionaria es la solución acuosa contenida en el interior
de las celdas formadas por las fibras de la celulosa, y es por tanto una forma de cromatografía líquidolíquido.
Capítulo 1

1

Introducción a los métodos de separación
Cromatografía de gases. En este caso la fase móvil es un gas inerte (helio onitrógeno) y la fase
estacionaria es un sólido (cromatografía gas-sólido) o un líquido “sostenido” por un sólido inerte
(cromatografía gas-líquido). Este tipo de cromatografía siempre es en columna, ya que es la única
manera de que la fase móvil gaseosa se mantenga fluyendo, confinada dentro del sistema. La columna
puede estar rellena con la fase estacionaria, en forma semejante a la cromatografíalíquida, o bien la fase
estacionaria puede depositarse sobre las paredes de un tubo muy delgado (0.25mm de diámetro) y largo
(hasta 100m). Este tipo de columnas se conocen como columnas capilares y proporcionan la mayor
capacidad de separación. De acuerdo con el mecanismo de retención, la cromatografía se puede
clasificar en los siguientes tipos:


adsorción (normal, de fase reversa)



permeación sobregel



partición líquido-líquido



de afinidad



intercambio iónico

Las áreas de aplicación son muy diversas y abarcan prácticamente todas las actividades en las que
interviene la química, por ejemplo: se emplea en:
El análisis de drogas y fármacos en fluidos biológicos como la saliva, la sangre, la orina;
Seguir la transformación de las sustancias responsables de la transmisión...