Cuantificación De Vitamina A Y Vitamina E

1.1. Analisis de vitaminas A y vitAmina E

Reactivos
Diclorometano grado HPLC
Acetonitrilo grado HPLC
Metanol grado HPLC
Pentano para análisis

Estándares

Estándar Vitamina A (palmitatode retinol) o estándar de trabajo (materia prima de fabricación caracterizada frente a un estándar primario).
Estándar Vitamina E (acetato de tocoferol) o estándar de trabajo (materia prima defabricación caracterizada frente a un estándar primario).

Preparación de Fase móvil

Fase móvil A: medir en una probeta por separado 520 mL de metanol grado HPLC y 380 mL de acetonitrilo grado HPLC.Mezclar y filtrar a través de filtros de membrana de 0,45 µm.
Fase móvil B: Diclorometano HPLC filtrado.

Condiciones Cromatográficas

Columna: LiChroCART® 125-4 mm Lichrospher 100 RP 18 5µm, osimilar
Flujo: 1,4 mL/min
Volumen de inyección: 20 µl
Fase móvil A =Solución Fase móvil A
Fase móvil B = Diclorometano grado HPLC
Tiempos de Retención: Vitamina E Acetato 2,5 – 4,0 min
Vitamina Apalmitato 4,5 – 7,0 min
Isocrático: 90 % Fase móvil A: 10% Fase móvil B
Longitudes de onda:
Vitamina E λ=284 nm
Vitamina A λ=326 nm
Tiempo (min) | λ (nm) |
0.00 | 284 |
4.00 | 326 |
12.00| fin |

Preparación de la Solución Estándar

Solución Estándar: Pesar 63 mg, exactamente pesados, de estándar de vitamina E (acetato de tocoferol) y una cantidad equivalente a 8000 UI,exactamente pesados, de Vitamina A (palmitato de retinol) 1,0 mill. UI/g, en un matraz de 100 mL. Añadir 20.0 mL de Pentano y 20,0 mL de Diclorometano. Disolver y enrasar el matraz con acetonitrilo.
El peso devitamina A a pesar se puede determinar con la siguiente fórmula:

Ej. : Para un estándar de concentración 1000 UI/mg se pesan aprox. 8,00 mg de vitamina A, exactamente pesados, a un matraz de 100mL. Añadir 20 mL de Pentano y 20 mL de Diclorometano. Disolver y enrasar el matraz con acetonitrilo.
Filtrar las disoluciones a través de filtros de membrana de 0,45 µm e inyectar.
Preparar el...