Cuantificación de azúcares reductores por el método de DNS

Cuantificación de azúcares reductores por el método DNS:

Preparación de la solución DNS: En un matraz volumétrico de 50 mL se añadieron 0.5 g Acido Di-Nitro Salicílico (DNS, Sigma-Aldrich gradoanalítico) con 0.8 g NaOH y 15.0 g Tartrato doble de sodio y potasio, se colocaron 30 mL de agua destilada, se mezcló y una vez disuelto, se llevó al aforo con agua destilada.

Preparación de lamuestra.- En un tubo de ensaye se colocaron 100µL de la muestra diluida convenientemente (de acuerdo al rango establecido con la curva de calibración) con 1000µL de la solución DNS; se tapó, agitó ycolocó por 10 minutos en un baño de temperatura entre 95-100°C. Una vez transcurrido el tiempo, las muestras se colocaron en un baño de hielo durante 2 minutos y se agregaron 2 mL de agua destilada y semezcló. Una vez que las muestras se encontraron a temperatura ambiente, se midió la densidad óptica en un espectrofotómetro a una longitud de onda de 540nm (Miller, 1959).

Curva de calibración: Parala elaboración de la curva de calibración se utilizó estándar de fructosa SIGMA-ALDRICH con 99% de pureza. Se prepararon 100 mL de una solución stock de 4.0 mg de Fructosa / mL de agua destilada. Setomaron distintas alícuotas para cubrir un rango de concentración de 0.0 a 2.6 mg de Fructosa con 5 niveles de concentración.

Fig. 1 Tratamiento de la muestra para cuantificar azúcares reductorespor técnica DNS.


1.1 Curva de calibración de Fructosa por técnica DNS

En la figura 6.1 se presentan gráficamente los resultados obtenidos en la curva de calibración del estándar de fructosa porla técnica de azúcares reductores DNS, en donde se observa que, en el rango de concentración de 0.0 a 2.4 mg de fructosa / mL de solución, existe una relación lineal entre el incremento de laconcentración contra la absorbancia obtenida, presentando un coeficiente de correlación R2 = 0.9978; demostrando que es una técnica confiable para la determinación de este tipo de azúcares reductores....