Cuantificación de proteínas por un método colorimétrico.

CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS POR UN MÉTODO COLORIMÉTRICO.

1.- Utilizar un método espectrofotométrico para medir la concentración de una proteína
2.- Determinar la concentración mediante ladetección de la absorbancia a 590nm.
3.- Cuantificar la concentración de una proteína utilizando un método colorimétrico: Determinación de proteínas por el método Lowry. REACTIVOS: Na2CO3 NaOH CuSO4.5H2O KNaC9H4O6 Reactivo fenol folin ciocalteau Solución A. Na2CO3 al 2% (p/v) en NaOH 0.1 N Solución B. CuSO4 .5H2O al 0.5% (p/v) Solución C. Tartrato de sodio y potasio al 1% (p/v) Solución D Mezclarvolúmenes iguales de solución B y C al momento de usarla Solución E. Por cada 50 mL de solución A agregar 1 mL de solución D. Solución F. Diluir volumen a volumen el reactivo de Folin con aguadestilada. MATERIAL 6 matraces volumétricos de 25 mL ó de 50 mL por si no hay suficientes. Espátulas 5 tubos falcon no estériles 1 micropipeta de 1000 µL 1 micropipeta de 200 µL 1 micropipeta de 20 µL 1 cajade puntas amarillas 1 caja de puntas azules 1 gradilla para tubos eppendorf 20 microtubos eppendorf

METODOLOGIA A) CURVA PATRÓN.
Preparar una solución estándar de albúmina 1 mg/mL. Diluir en unvolumen final de 200 µL con concentraciones finales de 0.05 mg/mL, 0.075 mg/mL, 0.1 mg/mL, 0.125 mg/mL, 0.15 mg/mL, 0.175 mg/mL y 0.2 mg/mL. Construye una tabla con los volúmenes de albúmina y agua queutilizarás para diluir las muestras así como su concentración final. A cada una de las diluciones adicionar 1 mL de reactivo de Lowry (solución E), agitar y reposar 15 min. Adicionar 0.1 mL dereactivo de Folin (reactivo F), agitar, dejar reposar 30 minutos. Leer a 590 nm contra blanco de reactivos. B) Grafica los resultados obtenidos de absorbancia contra concentración de albúmina, determina lapendiente, la ordenada al origen y R2. y = mx + b donde : x = concentración de proteína y = D.O. obtenida a 590 nm b = ordenada al origen C) CUANTIFICACION DE LAS MUESTRAS PROBLEMA 1) Tomar 20 µL de...