cuantificación de proteínas

Introducción
Este trabajo práctico fue realizado con el objetivo de determinar la cuantificación de las proteínas, el cual consistió en señalar la concentración de estas en una muestra. Para determinar la cuantificación existen diferentes métodos, como los de absorción (propiedad de las proteínas que tiene de absorber luz UV), los derivados fluorimétricos (formación de derivados químicos) ylos derivados colorimétricos (las proteínas son capaces de unirse a ciertos colorantes) que son el de Biuret, el de Bradford, el de Lowry y el de BCA.
En este práctico se utilizó el de Bradford (diseñado el año 1976), que se basa en la unión del colorante Azul Brillante de Coomassie (que solo reconoce a los aminoácidos como la arginina, fenilalanina, triptófano y prolina) a una proteínadesconocida y la comparación de esta unión con la de diferentes cantidades de una proteína estándar (en este caso se utilizó Albúmina Sérica de Bovino). Utilizando los valores de absorbancia que se obtuvieron de las muestras estándar, leídas a 569 nm en un espectrofotómetro, se realizó una curva de calibración (gráfico) y se calculó su ecuación correspondiente para así obtener la concentración deproteínas de las muestras problemas.
Como la muestra problema era una mezcla de 50 µL la cual contenía agua más la proteína estándar se necesitaba saber la concentración de proteínas que se encontraban en esta muestra por lo que con esto se presentó la primera interrogante: ¿Cuál era la concentración de proteínas que se encontraba en la muestra problema? también una segunda: ¿De qué forma seobtuvo esta concentración?
Objetivo: cuantificar la concentración de proteínas totales mediante una muestra problema basado en una curva estándar.

Método
La cuantificación de proteínas como ya se mencionó se realizó con el método de Bradford. Lo primero que se realizó, fue extraer 12 tubos de micro centrífuga (pequeñoscontenedores cilíndricos plásticos, con una tapa unida al cuerpo para evitar el desprendimiento del contenido) del frasco contenedor, estos se enumeraron de la forma A1, A2, A3, A4, A5, A6, B1, B2, B3, B4, B5, B6 (los tubos del grupo A son un duplicado del grupo B y viceversa, esto se realizó para luego sacar un promedio de cada muestra con su duplicado y así obtener valores más certeros). Luego seordenaron los tubos de menor a mayor en la gradilla en dos filas diferentes (en una los tubos A y en otra los tubos B). Después se tomó una micropipeta con capacidad de 20 – 200 µL, se le puso una punta (correspondiente a su tamaño),se le agregó a cada tubo los µL del reactivo Bradford (según la tabla I) después tomando la misma micropipeta, se le cambió la punta ( para no alterar las cantidades en uL delnuevo reactivo), se agregó el agua a cada tubo en las cantidades solicitadas que se encuentran en la tabla I , esto se agregó con mucha precaución, y por último se le agregó la proteína estándar (0,5 mg/mL), se utilizó nuevamente la micropipeta con la capacidad de 20 µL, ya que se trabajó con volúmenes de 4 µL, exceptuando los tubos de la enumeración A6, B6, ya que, estos contenían solo elagua más el Bradford (esto es para saber la absorbancia del agua).
A continuación se tomaron los tubos que fueron entregados por los profesores de laboratorio, los cuales contenían la muestra problema, que era la proteína estándar más agua quedando la mezcla en 50 µL por lo que de cada reactivo las proporciones eran desconocidas, al igual que los demás tubos se les agregó, con la micropipetacon capacidad de 200 µL, el reactivo de Bradford.
Finalmente se puso el contenido de cada tubo en la bandeja facilitada la cual contenía coordenadas (las fila eran las letras y las columnas los números) estos fueron ordenados según su enumeración, se anotaron las coordenadas de donde se colocó cada muestra, para así saber a que muestra correspondía cada resultado. Se entregó la bandeja al...