Cuantificacion de la ggt

I. PRACTICA # 10
DETERMINACIÓN DE LA GAMMA GLUTAMIL TRANSFERASA (GGT)
POR EL MÉTODO VISIBLE CINÉTICO DE SZASZ
II. COMPETENCIA: Determina la actividad enzimática de la gamma glutamiltransferasa en una muestra de suero sanguíneo.

III. PRINCIPIO DEL METODO: La Gamma Glutamil Transferasa (GGT) presente en el suero cataliza la transferencia del grupo gamma-glutamilo de laL-gamma-glutamil-3-carboxi-4-nitroanilina a la glicilglicina, para formar, L-gamma-glutamilglicilglicina y 5-amino-2-nitrobenzoato. El rango de liberación de 5-amino-2-nitrobenzoato es directamente proporcional ala actividad de la GGT presente en la muestra.
FUNDAMENTO
L-gamma-glutamil-3-carboxi-4-nitroanilina + glicilglicina L-gamma-glutamilglicilglicina +5-amino- 2-nitrobenzoato
Se mide el incremento de Absorbancia por minuto a 405 nm.

IV. ESPECIFICACIONES DEL DESEMPEÑO:
Estabilidad: 4 semanas de 2 a 8°C o 12 horas a temperatura ambiente (15 a25°C)
Leer a 405 nm. La temperatura debe ser constante.
Linealidad: a 300 U/L.
Sensibilidad analítica: 1 U/L = 0.00030 Δ abs/min

V. SISTEMA DE MUESTRAS PRIMARIAS:
TUBOS | MUESTRA |
RT para GGT |2.0 mL |
Mezclar e incubar 3 minutos en baño | María a 37°C |
SUERO | 200 µL |
Mezclar e incubar 1 minuto a 37°C.
En tiempos cronometrados de 60 segundos por cada lectura, leer la muestra a 1’,2’, 3’, 4’ y 5’ minutos. La temperatura debe ser constante.
Obtener la diferencia de absorbancias por minuto de la muestra (Δ abs/min).

VI. TIPO DE CONTENEDOR Y ADITIVOS:
1. 5 tubos de ensaye de13x100 mm
2. 2 vasos de precipitados de 500 y 250 ml
3. 1 termómetro
4. 4 fotoceldillas

VII. EQUIPO Y MATERIAL ADQUIRIDOS:
1. Gradilla
2. Torundas
3. Equipo vacutainer
4.Ligadura de látex
5. Aplicadores de madera
6. Papel parafilm

EQUIPO:
1. Baño maría
2. Centrifuga
3. Espectrofotómetro
4. Pipetas semiautomáticas de 1000 y 100 µL.

VIII....