Cuantificacion de proteinas por el metodo de biuret

Introducción
Las proteínas son macromoléculas que son solubles en agua. Estas se pueden clasificar de manera general en proteínas globulares y proteínas fibrosas. Las proteínas globulares son aquellas que tienden a agregarse en formas esferoidales y no establecen interacciones intermoleculares como lo son puentes hidrogeno (características de las proteínas fibrosas) siendo solubilizadas. (1)Las proteínas están compuestas de carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno. La mayoría también contienen azufre y fósforo. Las mismas están formadas por la unión de varios aminoácidos, unidos mediante enlaces peptídicos. El orden y disposición de los aminoácidos en una proteína depende del código genético, ADN, de la persona.

En la leche hay tres clases de proteínas; caseína, lactoalbuminas ylactoglobulinas. (2)

La caseína es una proteína conjugada de la leche del tipo fosfoproteína que se separa de la
leche por acidificación y forma una masa blanca.

La caseína representa el 80% de las proteínas presentes en la leche y el 27% en composición de la leche líquida. Estas proteínas precipitan del líquido cuando esta toma un pH acido de 4.6.

La propiedad característica de lacaseína es su baja solubilidad a pH 4.6. (3)

La organización de una proteína viene definida por cuatro niveles estructurales denominados: estructura primaria, estructura secundaria, estructura terciaria y estructura cuaternaria. Cada una de estas estructuras informa de la disposición de la anterior en el espacio. (4)

Existen técnicas para la purificación de la proteína como lo es lacentrifugación clínica. La centrifugación es un método por el cual se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad mediante una fuerza rotativa, la cual imprime a la mezcla con una fuerza mayor que la de la gravedad, provocando la sedimentación de los sólidos. (5)

Se han desarrollado técnicas se basan en la de complejos coloridos entre las proteínas y los reactivos específicos. Brandfor,Lowry, Espectrofometrico y otra de estas técnicas es la Biuret que al formar el complejo colorido tiene un máximo de absorción 540 nm.

La cuantificación de proteínas usando el reactivo de Biuret es un método muy utilizado por que es sencillo, rápido y económico. El reactivo de Biuret es una solución alcalina de cobre que forma un complejo de color azul purpura, con los enlaces peptidicos de lasproteínas.

Para cualquier método de colorimétrico es necesario realizar una curva patrón que sirva de apoyo para la determinación de la concentración de la proteína de una o varias muestras problema. La curva se elabora con una disolución de proteína cuya concentración es conocida, como albumina de suero bovino. (6)







Resumen

En bioquímica es común aislar y purificarproteínas para estudiar su composición, su estructura y en lo posible su función, y para ello hicimos uso de procedimientos prácticos que nos permitieron aislar la proteína de la leche, en específico la caseína.
El objetivo es poner en práctica métodos bioquímicos para la purificación parcial de proteínas, basados en sus propiedades de solubilidad así como aislar la caseína de la leche a partir de supunto isoeléctrico. Para lograrlo hicimos uso de material y equipo de laboratorio como la centrifuga clínica que nos ayudó para la precipitación de la proteína (esta gira muy rápido, las sustancias más pesadas soportan una centrifuga mayor y se separan de las menos pesadas).
Al final después de haber realizado nuestro procedimiento se recuperó el precipitado y ¿Qué es un precipitado? Es el sólidoque se produce en una disolución por efecto de una reacción química o bioquímica. Este se colocó en el papel aluminio para que se secara y quedara como polvo.
Para la cuantificación de proteínas obtenidas de la leche calentamos el agua a una temperatura de 50-55°C (en nuestro caso el agua dentro del vaso de precipitados).Numeramos los tubos y un duplicado de ellos, de acuerdo con la tabla en...