Cuantificacion De Proteinas

Titulo: CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Introducción En general, no hay un método completamente satisfactorio para medir la concentración de proteínas en una muestra. La elección del método depende de lanaturaleza de la proteína, de los otros componentes de la muestra problema, de la rapidez y sensibilidad deseada. Existen diferentes métodos basados en la propiedad intrínseca de las proteínas paraabsorber luz en el UV, para la formación de derivados químicos, o la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes. Con el objetivo de cuantificar proteínas IgG mediante técnicasespectroscópicas para luego obtener el rendimiento de la misma se utilizaron los métodos de Biuret y Folin Lowry. Método de Biuret: se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu2+ y losgrupos NH de los enlaces peptídicos en medio básico, el complejo tienen un máximo de absorción a 540 nm La intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad de proteínas (enlacespeptídicos) y la reacción es bastante específica. El método se usa para soluciones que tienen de 0.5 a 10 mg proteína/ml. Es un método poco sensible. Es útil cuando se quiere analizar grandes lotes deproteína. Método de Folin Lowry: El color producido por el método de Lowry resulta de la reacción de Biuret sobre los enlaces peptídicos, además de la reducción del reactivo de fosfomolibdato-fosfotungstato(Folin-Ciocalteu) por las proteínas pretratadas con cobre en medio alcalino. El Cu+ y los grupos R de la tirosina, triptofano y cisteína reaccionan con el reactivo de Folin, produciendo un productoinestable que es reducido a azul El color azul, es determinado a 700nm.Este es un método muy sensible, por lo que permite trabajar con soluciones muy diluidas de proteínas (0.02 - 0.5 mg proteína/ml)Materiales y métodos: Método de Folin Lowry: Se realizó una dilución de 1:10 para la muestra, con el objeto de evitar que la absorbancia salga fuera de la curva. Seguidamente se agrego 1mL de solución...