Cuantificacion De Proteinas

Universidad de Santiago de Chile
Facultad Tecnológica
Ingeniería de Alimentos

Integrantes:
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Profesora: Myriam Pizarro
Ayudante: Nubia Ascencio
Fecha: 31-mayo-2012
Resumen
Lasproteínas son de suma importancia en nuestro organismo por las múltiples funciones que en él cumple. Es necesario en ocasiones determinar la cantidad de proteínas que poseen las sustancias, ya sea para saber de qué tipo de sustancia se está hablando o bien solo por cuantificación, en esta ocasión el objetivo es utilizar para esto los métodos de Biuret y Bradford, en ambos métodos se realizan curvas decalibración. Para Biuret se tienen 6 tubos de ensayo en los que se vierten distintos volúmenes de solución estándar (2, 4, 6, 8 y 10 mg de albúmina), el sexto tubo será el blanco (sin proteínas), colocar agua destilada hasta llegar a 1ml y agregar 4 ml de reactivo Biuret, mezclar y luego de 30 minutos medir absorbancia. Realizar el mismo procedimiento con la muestra problema, el que luego se deberepetir pero con interferentes. Las concentraciones obtenidas por este método fueron: mp. “T” 0.82 mg/ml; mp. “S” 8.58 mg/ml; y con interferencia se obtuvo: mp S1+ TCA 6.69 mg/ml; mp S2+ SDS 4.02 mg/ml; suero fisiológico 45.89 mg/ml. En Bradford se utilizan unidades de medida más pequeñas, su procedimiento consiste en tener 6 tubos eppendorf con 1ml de reactivo Bradford, el último será el blanco, acada uno agregar 2, 4, 6, 10, 12 µl de BSA, agitar y realizar medición. Para muestra problema se toman 2 µl de ésta y 1 ml de Bradford, agitar y medir. Para los interferentes repetimos el proceso y luego con la leche diluida. Los resultados de las concentraciones obtenidas fueron: mp. BSA”T” 12.85 µg/ml, mp. BSA”S” 5.24µg/ml, con interferentes: SI1+EDTA 0.037µg/ml; SI2+TCA 3.274µg/ml y leche diluida21.90µg/ml. Los dos métodos se diferencian en su sensibilidad, Biuret usa concentraciones mayores, por eso los precipitantes y quelantes lo afectan, en cambio en el método de Bradford al ser más sensible, el detergente es el único que interfiere.
Introducción
Las proteínas son biopolímeros de aminoácidos cuya presencia en el organismo y la vida de los seres vivos es de suma importancia eindispensables para el desarrollo de funciones vitales. Poseen una organización basada en cuatro niveles los que son: Estructura Primaria, Secundaria, Terciaria y Cuaternaria. Además cumplen variadas funciones como por ejemplo: Función estructural, enzimática, hormonal, reguladora, defensiva, entre otras.
Existen variados métodos para la cuantificación de proteínas, entre ellos encontramos Biuret,donde la cantidad del color producido es proporcional al número de enlaces peptídicos, y por lo tanto a la cantidad de proteína y el método Bradford donde el cambio en la absorbancia a 595nm es proporcional a la concentración de proteína en la muestra. En este laboratorio los objetivos son realizar una curva de calibración de proteínas para método de Biuret y Bradford y además determinar laconcentración de proteínas de una muestra problema.
Materiales y métodos
* Los materiales a utilizar son: Reactivo Biuret, Reactivo Bradford, solución estándar seroalbumina de bovino (BSA) 10 mg/mL, agua destilada, 6 tubos de ensayo y 6 tubos eppendorf, micropipetas, pipetas, Espectrofotómetro, cubetas de plástico de 1ml.
* Procedimiento Biuret: se tienen 6 tubos de ensayo en los que se viertendistintos volúmenes de solución estándar (2, 4, 6, 8 y 10 mg de albúmina), el sexto tubo es el blanco que no tiene proteínas, colocar agua destilada hasta llegar a 1ml y agregar 4 ml de reactivo Biuret, mezclar y luego de 30 minutos medir absorbancia. Realizar el mismo procedimiento con la muestra problema, y luego repetir pero con interferentes y luego hacer lo mismo para el suero fisiológico....