cuantificacion enzimatica














Informe de Laboratorio

‘‘Cuantificación de Proteínas ’’

BIO - 005





Fecha: 12/09/2014

Introducción

Las proteínas son moléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos. Estas biomoléculas desempeñan un papel fundamental para la vida, son las más versátiles y diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo y realizanuna enorme cantidad de funciones diferentes en las células de todos los seres vivos.
Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en: a) la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV, b) para la formación de derivados químicos, o c) la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes.
Los métodos másutilizados son el método de Biuret, el método de Lowry, el método de Bradford y el método turbidimétrico. En este informe se mostrarán y analizarán los resultados de cuantificación de proteínas a través del método Biuret con el espectrofotómetro.

Objetivos

1) Conocer métodos para cuantificar las proteínas presentes en una muestra biológica.
2) Elaborar e interpretar una curva de calibración.
3)Determinar la concentración de proteínas presentes en una muestra.


Procedimiento experimental - materiales y métodos

Actividad 1: Cuantificación de Proteínas.

En el proceso de esta actividad se tomaron 8 tubos de ensayo, se le añadió una etiqueta colocando el número del tubo y lo que se agregaría a dichos tubos:
Tubo 1: se coloco en el tubo, 2 mL de NaCl 0,9% m/v y 2 mL de Reactivo deBiuret, utilizando la pipeta graduada con la propipeta.
Tubo 2: se añadió 1,9 mL de NaCl 0,9% m/v, 0,1 mL de SAB 5 mg/mL y 2 mL de Reactivo de Biuret, se utilizó la micropipeta para colocar las soluciones en el tubo de ensayo.
Tubo 3: se añadió 1,75 mL de NaCl 0,9% m/v, 0,25 mL de SAB 5 mg/mL y 2 mL de Reactivo de Biuret, se utilizó la micropipeta y también la pipeta graduada.
Tubo 4: seañadió 1,5 mL de NaCl 0,9% m/v, 0,5 mL de SAB 5 mg/mL y 2 mL de Reactivo de Biuret, en el cual ocupamos la micropipeta para añadir los reactivos.
Tubo 5: se añadió 1,25 mL de NaCl 0,9% m/v, 0,75 mL de SAB 5 mg/mL y 2 mL de Reactivo de Biuret, de la cual se ocupo la micropipeta para colocar los reactivos en el tubo de ensayo.
Tubo 6: se coloco 1 mL de NaCl 0,9% m/v, 1 mL de SAB 5 mg/mL y 2 mL deReactivo de Biuret, ocupando la micropipeta junto con la pipeta graduada y la propipeta para poder extraer la solución de sus respectivos objetos de almacenamiento.
Tubo 7: se colocó 2 mL de Solución de Ovoalbúmina y 2 mL de Reactivo de Biuret, usando la pipeta y la propipeta para colocar los reactivos.
Tubo 8: se colocó 2 mL de Solución de Ovoalbúmina y 2 mL de Reactivo de Biuret, usando la pipeta yla propipeta para colocar los reactivos.
Después se colocaron todos los tubos en la gradilla (Imagen 1) para luego situarlo en el baño termorregulador a 50° C por 5 minutos, y después medir la absorbancia para cada tubo.
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Resultados


Actividad 1: Cuantificación de Proteínas.




Absorbancia de cada tubo



Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
Tubo 6
Tubo 7
Tubo 8
00,225
0,449
0,853
0,895
0,778
0,199
0,212

Curva de calibración:



Discusión

El propósito de este laboratorio es cuantificar proteínas, a través de una curva de calibración que se traza en el grafico de calibración, que nos proporcionara de valores tales de las concentraciones de proteínas y absorbancia presentes en la muestra.
En el análisis de los gráficos se observa la granimportancia y la exactitud con la que se deben utilizar las pipetas al momento de medir los reactivos , ya que una mala manipulación de estas provoca un gran margen de error , y esto fue lo que nos hiso errar en nuestros cálculos posteriores en la grafica, ya que no arrojo la curva de calibración que no abordo los resultados que nos dieron las muestras en los tubos de ensayos.
De acuerdo a...