cuantificador de proteinas


Biología celular y genética
Facultad de Odontología
Universidad de Chile


Cuantificación de proteínas

















Introducción

Las proteínas son moléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos. Estas biomoléculas desempeñan un papel fundamental para la vida y son las más versátiles y diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo yrealizan una enorme cantidad de funciones diferentes en las células de todos los seres vivos. Por un lado, forman parte de la estructura básica de los tejidos (músculos, tendones, piel, uñas, etc.) y, por otro, desempeñan funciones metabólicas y reguladoras (asimilación de nutrientes, transporte de oxígeno y de grasas en la sangre, inactivación de materiales tóxicos o peligrosos, etc.).
También sonlos elementos que definen la identidad de cada ser vivo, ya que son la base de la estructura del código genético (ADN) el cual determina la estructura y función de las proteínas. (1)
Determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica es una técnica de rutina básica cuando se aborda un esquema de purificación de una proteína concreta, cuando se quiere conocer la actividad específicade una preparación enzimática, para el diagnóstico de enfermedades, así como para muchos otros propósitos. Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en: a) la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV, b) para la formación de derivados químicos, o c) la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes.
Losmétodos más utilizados son el método de Biuret, el método de Lowry, el método de Bradford y el método turbidimétrico. (2)
En este informe se mostrarán y analizarán los resultados de cuantificación de proteínas a través del método turbodinámico, basado en la precipitación de proteínas en presencia de un ácido.
La turbidimetría mide la disminución de la luz transmitida a través de una suspensiónde partículas utilizando para ello un espectrofotómetro (detector en la misma dirección del haz de luz, se mide absorbancia o transmitancia). Se suele utilizar para soluciones concentradas (para que haya una buena disminución de la luz transmitida) como por ejemplo en la determinación de proteínas totales en suero, LCR u orina (haciendo que las proteínas precipiten con TCA o ácido sulfosalicílico).(3)
Se determinará la concentración de proteínas con una solución acuosa de una proteína desconocida, utilizando el método turbidimétrico y la proteína albumina sérica bovina (BSA), extraída de suero sanguíneo, como estándar y proteína patrón.
La albúmina es una proteína que se encuentra en gran proporción en el plasma sanguíneo, siendo la principal proteína de la sangre, y una de las másabundantes en el ser humano. Es sintetizada en el hígado.
Esta proteína es fundamental para el mantenimiento de la presión osmótica, necesaria para la distribución correcta de los líquidos corporales entre el compartimento intravascular y el extravascular, localizado entre los tejidos. También transporta distintos tipos de hormonas, ácidos grasos, bilirrubina, fármacos y drogas. Por último controla elpH y funciona como regulador de líquidos extracelulares. (4)

Objetivos
- Determinar la concentración de proteínas de una muestra desconocida a partir de una curva estándar en un gráfico con concentraciones de proteínas de muestras conocidas.
Materiales y métodos
Materiales
- Ácido sulfosalicílico
- Agua destilada
- Micropipetas
-Tubos de Eppendorf
- Placa de Elisa
- Puntas desechables(para las micropipetas)
- Proteína Albúmina Sérica Bovina (BSA)
Métodos
Ya que la solución de BSA “stock” fue entregada ya preparada, lo primero que se hizo fue añadir agua destilada en 7 Tubos de Eppendorf. Al primer tubo se le añadió 150 uL ya que este no tendría solución BSA “stock”, al segundo tubo fueron añadidos 120 uL, y así sucesivamente disminuyendo 30 uL por vez hasta llegar al...