cuantificaion de proteinas

INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA

CQU-310



Cuantificación de
Proteínas





Integrantes: Eduardo Galindo
Santiago Acevedo

Sección: 403

Nombre profesores

Fecha









INTRODUCCIÓN

Desde 1852 la ley de Bourguer-Lambert-Beer ha sido usada como la base cuantitativa de la espectroscopia de absorción. Bourguer en 1729 estableció empíricamente unacorrelación entre la longitud de la trayectoria de la luz y la absorción de esta
La Espectroscopia fue originalmente el estudio de la interacción entre radiación y materia en función de la longitud de onda (λ'' ''). De hecho, históricamente, la espectroscopia se refirió a la utilización de la luz visible dispersada según su longitud de onda, por ejemplo por un prisma.
Más tarde el concepto se amplióenormemente para comprender cualquier medición de una cantidad en función de la longitud de onda o frecuencia.
Determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica es una
Técnica de rutina básica cuando se aborda un esquema de purificación de una
Proteína concreta.

Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de
estos métodos se basan en: a) la propiedadintrínseca de las proteínas para
absorber luz en el UV, b) para la formación de derivados químicos, o c) la
capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes.
Los metodo de determinación de proteínas por Lowry es de valoración cuantitativa y es uno de los más usados en Bioquímica. Cuando a un péptido o proteína en disolución básica se le hace reaccionar con cobre se forma uncompuesto colorido por coordinación entre los nitrógenos del péptido con el ión metálico. En el método de Lowry el reactivo de Folin-Ciocalteu (fosfomolibdato.fosfotungstato) se añade para incrementar la cantidad de color desarrollado. El aumento en el color ocurre cuando el complejo de cobre tetradentado transfiere los electrones al complejo fosfomolibdato/ fosfotungstato, reacción que produce unacoloración azul que se lee a 750 nm. La reducción del reactivo de Folin-Ciocalteu ocurre solamente con los residuos de tirosina y triptófano de la proteína.
















OBJETIVOS;


- Aplicar un método espectrofotométrico para medir la concentración de una proteína.

-Recordar las leyes básicas de absorción de luz para la determinación
Cuantitativa de compuestoscoloreados.

-determinar espectofotometricamente la concentración de albumina, utilizando método de lowry

-conocer de forma ordenada los materiales a utilizar con sus
correspondientes capacidades y cantidades a usar

-conocer los reactivos a utilizar con la respectiva concentración

- conocer el método de cuantificación a utilizar

-entender el resultado expresado un grafico acompañado de surespectiva tabla de datos



























MÉTODOS;

Se determinará la concentración de Albúmina de Suero de Bovino (BSA)

Para determinar la concentración de proteínas de una muestra problema se construye una curva de calibrado a partir de una solución patrón de BSA 0.4 mg/ml.

El tubo que solo tiene agua destilada y los reactivos, sirve de blancopara el ajuste de equipo a cero absorbancia.




MATERIALES;

- 8 tubos de ensayo
- 3 pipetas graduadas de 1 ml
- pipeteadores plásticos
- 1 pipeta graduada de 5 ml
- 1 vaso precipitado de 50 ml
- agua destilada
- solución de Albúmina de Suero de Bovino con concentración de 0.4 mg/ml
- 24 ml de reactivo de folin
- 6 ml de R.C.A. (Reactivo de cobre alcalino)PROCEDIMIENTO;

Comience a agregar los reactivos que se indican en la siguiente tabla cuidando de seguir correctamente el orden asignado y los tratamientos que se especifican a continuación:

1.- Agregar la solución de proteína (BSA ó MP)
Se debe agregar a 5 tubos de ensayo Albúmina de Suero de Bovino con una concentración de 0.4 mg/ml . tubos q están...