CUARTO INFORME DE LABORATORIO

CUARTO INFORME DE LABORATORIO
ESPECTROFOTOMETRA, PROPIEDADES FISICAS DE LOS AMINOACIDOS, CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA Y REACCIONES GENERALES DE PROTEINAS



SEBASTIAN GIRALDO MÁRQUEZ
ALEJANDRO MOLINA GIRALDO
JHONATAN ANDRES NARANJO ARANGO
SEBASTIAN AUGUSTO QUICENO OROZCO




DOCENTE
EDISON AUGUSTO LONDOÑO








UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE PEREIRA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
MEDICINA
24 DEABRIL DE 2015
OBJETIVO PRINCIPAL

Conocer y utilizar correctamente la espectrofotometría como procedimiento útil en la determinación de la concentración de alguna sustancia en una solución. Reconocer las propiedades de los aminoácidos a partir de la adición de reactivos y el uso de la cromatografía en capa fina como un método para la identificación de los aminoácidos. Identificar las reacciones delas proteínas a partir de cambios visibles como precipitados, color, etc.; por medio de pruebas con el fin de demostrar prácticamente la base teórica dada por el docente.





















LABORATORIO DE ESPECTROFOTOMETRIA

PARTE I
CURVAS DE ABSORBANCIA DE COLORANTES

En esta primera parte del laboratorio se tomó 3 mL de los colorantes a los que llamaremos analitos, Azul de Bromofenol, Naranjade Metilo y con una mezcla de ambos colorantes, se depositaron en las celdas y con ayuda del espectrofotómetro se determinó la absorbancia de los colorantes en longitudes de onda entre los 400 y 700 nm (nanómetros).

TABLA 1. AZUL DE BROMOFENOL
Longitud de onda  λ (nm)
Absorbancia
400
0, 080
420
0,021
440
0,021
460
0,040
480
0,075
500
0,140
520
0,246
540
0,404
560
0,616
580
0,933
600
0,946
6200,254
640
0,100
660
0,100
680
0,100
700
0,100





GRAFICA DE ABSORBANCIA EN FUNCION DE LONGITUD DE ONDA
(AZUL DE BROMOFENOL)

La longitud de onda que produjo la absorbancia máxima en el azul de bromofenol fue de 0,924 nm.
TABLA 2. NARANJA DE METILO

Longitud de onda  λ (nm)
Absorbancia
400
0,443
420
0,580
440
0,685
460
0,759
480
0,709
500
0,500
520
0,248
540
0,082
560
0,011
580
0
600
0
620
0
640
0660
0
680
0
700
0

GRAFICA DE ABSORBANCIA EN FUNCION DE LONGITUD DE ONDA
(NARANJA DE METILO)

La longitud de onda que produjo la absorbancia máxima en el naranja de metilo fue de 0,759.

TABLA 3. MEZCLA DE COLORANTES

Longitud de onda  λ (nm)
Absorbancia
400
0,296
420
0,334
440
0,382
460
0,420
480
0,410
500
0,332
520
0,273
540
0,278
560
0,356
580
0,529
600
0,534
620
0,149
640
0,036
660
0,019
6800,019
700
0,015


GRAFICA DE ABSORBANCIA EN FUNCION DE LONGITUD DE ONDA
(MEZCLA DE COLORANTES)

La longitudes de onda máximas en la mezcla de ambos colorantes fue de: λ1= 0,420 y  λ2= 0,534.
PARTE II
DEMOSTRACION DE LA LEY DE BEER
En esta segunda parte se procede a preparar soluciones de distinta concentración de azul de bromofenol y naranja de metilo, luego se estableció la absorbancia de estassoluciones utilizándose la longitud de onda en que se obtuvo el máximo valor de absorbancia.
CURVAS DE CALIBRACION
Azul de Bromofenol
Tubo No.
Azul de Bromofenol
Absorbancia
1
7.5 *10-5 M
0,220
2
3.8 * 10-5 M
0,338
3
2.5 * 10-5 M
0,588
4
1.9 * 10-5 M
0,777
5
1.5 * 10-5 M
0,960
Solución desconocida
3,96 * 10-6 M
0,254

Naranja de Metilo
Tubo No.
Anaranjado de metilo
Absorbancia
1
1.6 *10-4 M0,136
2
7.8 * 10-5 M
0,296
3
5.2 * 10-5 M
0,436
4
3.8 * 10-5 M
0,582
5
1.5 * 10-5 M
0,743
Solución desconocida
4,13 * 10-6 M
0,205


Se halló la concentración de las soluciones desconocidas, así:

Donde A es absorbancia, E es el coeficiente de extinción molar, C es la concentración del colorante, y l es la longitud del medio ( en este caso la celda) que la luz debe atravesar. De manera que,despejando la ecuación queda así:
(Fórmula para calcular absorbancia especifica)
Reemplazando los valores conocidos, obtenemos que:



Con este dato ya determinado, podemos proceder a calcular la concentración de las soluciones desconocidas a partir de sus absorbancias:

De manera que:




GRAFICA DE LA CURVA DE CALIBRACION DEL AZUL DE BROMOFENOL












GRAFICA DE LA CURVA DE CALIBRACION DEL...