Cuestionario biologia molecular

ANTECEDENTES:

Técnica inventada por Kary Mullis, bioquímico estadounidense, debido a dicho invento lo llevó a ser ganador del premio Nobel de Química en 1993

PCR: Polymerase Chain Reaction¿QUÉ ES?

Producción de múltiples copias de un fragmento de ADN específico, incluso en presencia de millones de otras moléculas de ADN. Como su nombre indica, se basa en la actividad de la enzimaADN polimerasa que es capaz de fabricar una cadena de ADN complementaria a otra ya existente.
Sus únicos requerimientos son que existan nucleótidos en el medio que son la materia base para fabricar elADN (los nucleótidos de adenina, timina, citosina y guanina), y una pequeña cadena de ADN que pueda unirse a la molécula que queremos copiar para que sirva como cebadora (el cebador, en inglés"primer”)

REQUERIMIENTOS:

*DNA polimerasa termoestable

*Nucleotidos trifosfatados dNTPs (dATP, dTTP, dGTP y dCTP) de 10 mM

*Cloruro de magnesio ( 1.5 a 3 mM)

* Dos secuencias de primers quesirven de blanco

FACTORES PARA PCR:

Temperaturas

 Temperaturas temperatura de desnaturalización
 temperatura de hibridación de los iniciadores
 temperatura de extensión

- 95ºC paraseparar la hebras de DNA
- 60ºC para trabajar con la DNA polimerasa
- 72ºC por si se requiere aumentar la velocidad

Repetición de ciclos

El proceso se lleva a cabo por ciclos de copiado donde seirán copiando las partes de DNA necesaria y esa copia irá creciendo exponencialmente
*35 a 40 ciclos para amplificación de molde

Fases de PCR
 Desnaturalización. Antes de que la replicación selleve a cabo, la doble hebra de DNA debe ser abierta. En la PCR el calor se utiliza para desnaturalizar la doble hélice de DNA.

 Alineamiento. Antes de que una región blanco de DNA pueda seramplificada, uno debe determinar las secuencias de DNA de la región de los lugares específicos del sitio de interés. Estas áreas entonces se utilizan para hacer los pedazos cortos de DNA, llamados...