Cuestiones Parte I

REGULACIÓN DE LA PROLIFERACIÓN Y
DESTINO CELULAR
Cuestiones Parte I
Regulación de la proliferación
1) Describe el fenotipo terminal de los distintos mutantes cdc de S. Cerevisiae que se muestran en las figuras
indicando la función en el ciclo celular para la que se requiere la proteína mutada.

2) Has aislado una cepa mutante de levadura que se divide normalmente a 28°C pero no puede entrar enmitosis
a 37°C. El análisis del mutante a la temperatura restrictiva indicó que las células carecían de actividad CDK
mitótica. Has purificado la ciclina mitótica y la CDK mitótica y has encontrado que son normales y pueden formar el
complejo CDK-ciclina mitótica a ambas temperaturas. ¿Qué mutaciones termosensibles podrían ser responsables
del bloqueo de la mitosis en dicho mutante?
3) Describe unexperimento que demuestre que la fosforilación de la Thr160 es esencial para la función biológica
de la CDK.
4) El factor de transcripción SBF (Swi4-Swi6) controla la expresión periódica con un máximo en G1/S de genes
implicados en morfogénesis y biogénesis de pared celular. Las cepas mutantes swi4 y swi6 crecen bien en medio
normal. Sin embargo, cuando se crecen en medios que contienecompuestos que afectan a la integridad de la
pared celular como calcofluor white (CFW) y SDS se obtiene los resultados que se muestran en la figura.
Interpreta y valora el resultado obtenido.

5) Un cultivo de una cepa mutante cdc53 de S. cerevisiae se incuba a 37°C durante dos horas. Dibuja y justifica el
resultado que se obtendría al analizar por FACS (citometría de flujo) el contenido de DNA. ¿Quéexperimento
harías para demostrar tu argumentación? (Dato: Cdc53 es un componente de la ubiquitinligasa SCF)
6) Clb5 y Clb6 son las ciclinas de S. cerevisiae encargadas del disparo de los orígenes de replicación. Mientras
que Clb5 actúa sobre orígenes tempranos y tardíos, Clb6 solo es funcional sobre orígenes tempranos. Sabiendo
en act quinasa (en act enzimática)
que no hay diferencias intrínsecasentre ambas ciclinas, ¿a qué se debe la diferencia observada? ¿Qué
experimento diseñarías para comprobarlo?
7) Describe y justifica el fenotipo terminal de una célula de S. cerevisiae si se bloquea la formación del huso
acromático con nocodazol, una droga que inhibe la polimerización de microtúbulos. El checkpoint del huso
acromático se caracterizó mediante un análisis genético en S. cerevisiae.Describe la aproximación experimental
utilizada.
Cdc20

8) La transición metafase-anafase se inicia con la activación de APC
. Partiendo de dicho momento, haz una
narración de los procesos que llevarán a la célula a completar la mitosis comentando los acontecimientos que se
reflejan en la figura B y los mecanismos responsables. ¿Qué ocurre en el caso de un mutante en la ruta MEN
(figura C)?

9) Elcontrol del ciclo celular implica el ensamblaje de sistemas bioquímicos osciladores. ¿Qué mecanismos
contribuyen a establecer el oscilador de la fosfatasa Cdc14 en S. cerevisiae?
10) En la figura se indica si los distintos mutantes que se muestran realizan la salida de mitosis o no. Coméntalo.
(Datos: Dyn1 controla orientación del huso; Esp1 es la separasa; Cdc26 es una subunidad de APC; Bub2 esun
componente de la ruta MEN).

11) Recientemente se ha descrito que la fosfatasa Cdc14 defosforila a la securina y que como consecuencia de
esa defosforilación favorece la degradación de la securina. ¿Qué aporta la existencia de este mecanismo en el
control de la transición metafase-anafase?

12) Se preparan mezclas de reacción en un sistema experimental libre de células que contienenextractos de
huevos de Xenopus tratados o no con RNasa y un núcleo de esperma de Xenopus. Se añade un inhibidor de la
RNAasa y a continuación el mRNA que codifica ciclina B o una versión mutante de ciclina B a la que se le ha
eliminado la caja destructora. Se visualizan los cromosomas mediante tinción del DNA con una sonda fluorescente
y el huso acromático mediante tinción de tubulina con otra sonda...