Cultivo celular
El cultivo celular es un conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de las células en condiciones in vitro, manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas.
Esta técnica se desarrolló a partir de los últimos años del siglo XIX como una continuación de las técnicas de la embriología. Wilhem Roux mantuvo en el año 1885 células de embriónde pollo en solución salina durante unos días. Sin embargo se considera al zoólogo americano R. G. Harrison como el iniciador de los cultivos de tejidos animales, quien en 1907 fué el primer científico que empleó técnicas in vitro para el estudio de fenómenos in vivo, realizando cultivos de médula espinal embrionaria de anfibios. Entre los años 1920 y 1940 se desarrollaron diferentes estrategiasde obtención de cultivos y de mantenimiento de las condiciones estériles, pero sin grandes avances. A partir de los años 40, con el aislamiento de los primeros antibióticos, se desarrollaron numerosas aplicaciones. En 1955, Eagle realiza la primera investigación sistemática de los requerimientos nutritivos de las células en cultivo. En la década de 1980 se empiezan a conocer los mecanismos de latransformación.
En la década de 1990 empezaron a producirse medicamentos a escala industrial en biorreactores. Se desarrolla la biotecnología. En 1998 se produce cartílago mediante ingeniería de tejidos y en 2003 se experimenta el auge de esta nueva disciplina. En 2007 se reprograman células adultas para convertirlas en células pluripotenciales inducidas.
Las técnicas de cultivos celulares,debido a su gran utilidad y demanda en el campo de la ciencia, en la actualidad están en constante desarrollo e innovación.
Fundamento.
Para efectuar el estudio celular, se han diseñado diversos métodos que permiten cultivarlas bajo condiciones artificiales, en los que es posible cultivarlas bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo de célula. Una de las técnicas más usadas en elárea de la biología celular consiste en transferir una muestra biológica de un ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que permite obtener cultivos celulares. Cultivar una célula significa promover intencionalmente el desarrollo de ésta en medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas. Una población celular desarrollada en un medio se denomina cultivo. A l efectuar esteprocedimiento, es necesario considerar que en el área de trabajo, existen muchos microorganismos que pueden contaminar el medio de cultivo con el que trabajamos; debido a esto, es necesario tomar precauciones para impedir que éstos penetren y contaminen los cultivos en estudio. Por otra parte, para considerar no sólo el aspecto nutricional, sino también las condiciones ambientales de su hábitatnatural, por lo que en el medio de cultivo se ajusta el pH y concentración de sales y durante la incubación condiciones tales como la temperatura, ventilación, la luminosidad. La aplicación de estos procedimientos ha permitido obtener microorganismos en cultivos mixtos, así como su aislamiento y la obtención de cultivos puros, facilitando de este modo, el estudio, caracterización, aplicación y controlde los mismos. La forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo de celula y propósito específico del estudio.
Procedimiento.
El cultivo de tejidos animales ha tenido un gran desarrollo en los últimos cien años, gracias al desarrollo de la técnica aséptica y al conocimiento acumulado acerca de la fisiología, el metabolismo y los requerimientos nutricionales de las células. Dado que elcultivo celular es adecuado para el estudio del desarrollo y diferenciación, las líneas celulares que conservan la capacidad de diferenciarse in vitro son objeto de intensos estudios. Existen cierto tipo de investigaciones que no podrían realizarse sin el cultivo de células, como los trabajos en transgénesis.
Procedimiento para aislamiento y cultivo de hepatocitos en rata.
1. Perfusión del hígado...
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