Cultivo celular

CULTIVO CELULAR

Tripsinización y subcultivo de células de una monocapa

Un cultivo primario se cultiva en una placa de Petri de 60 mm o 25-cm2 matraz de cultivo de tejido que contenía 5 ml demedio de cultivo de tejidos. Las células se dispersaron por tratamiento con tripsina y a continuación se volvieron a sembrar en cultivos secundarios. El proceso de eliminación de las células delcultivo primario y su transferencia a cultivos secundarios constituye un conducto, o subcultivo.

Materiales:
Cultivo primario celular
HBSS con Ca2+ and Mg2+, 37°∆C
Trypsin/EDTA solution (see recipe),37°∆C
Completar medio con suero: por ej; DMEM con 10% a 15% (v/v) FBS (complete DMEM-10 or -15), 37°∆C
Pipetas Pasteur estériles
37 ° C o incubador bandeja de calentamiento
Cultivo con materialde plástico o vidrio, incluyendo pipetas y matraces de 25 cm2 o placas de Petri de 60 mm, estériles-

Nota: Todas las incubaciones de cultivo se deben realizar en una incubadora humedecida 37 ° C 5%CO2 a menos que se especifique lo contrario. Algunos medios (por ejemplo, DMEM) pueden requerir niveles alterados de CO2 para mantener el pH 7,4.

1. Retire todo el medio de cultivo primario conuna pipeta Pasteur estéril. Lavar la adhesión monocapa de células una vez o dos veces con un pequeño volumen de 37 ° C HBSS sin Ca2 + y Mg2 + para eliminar cualquier FBS residual que pueden inhibir laacción de la tripsina. 

Use una solución salina tamponada que sea libre de Ca2+ y Mg2+ para lavar las células. Ca2+ y Mg2+ en la solución de sal puede causar que las células se adhieran entre sí.Si este es el primer cambio de medio, en lugar de descartar medio que se retire del cultivo primario, ponerlo en un plato fresco o matraz. El medio contiene células no unidas que pueden acompañar ycrecer, proporcionando así un cultivo de seguridad.

2. Agregar suficiente solución de tripsina/EDTA 37 ° C al cultivo para cubrir la adhesión de capa de células.

3. Colocar la placa en una...