CULTIVO CELULAR

CULTIVOS CELULARES

M.V.Z. LILIANA ZUÑIGA MARTINEZ

CULTIVO CELULAR
Hacer crecer y proliferar
células disociadas in vitro

“En el vidrio”
Fuera del organismo

 El cultivo de tejidos comenzó en 1907 con un

experimento en el área de neurobiología.
 Se realizó el experimento usando pequeños trozos de
medula espinal en plasma coagulado dentro de una
cámara húmeda y caliente.
 Se observó quecada célula nerviosa emitían
prolongaciones largas y finas hacia el plasma coagulado.

TIPOS DE CULTIVOS CELULARES
Existen varios tipos de cultivos celulares:
1.

Cultivos primarios

2.

Cultivos secundarios

3.

Cultivos mixtos

4.

Líneas celulares**

CULTIVOS PRIMARIOS


El cultivo primario se puede realizar a partir de
animales adultos, embriones o huevos aunque
normalmente los tejidosembrionarios y
tumorales dan mejores resultados, debido a que
su grado de diferenciación es menor y su
capacidad de división es mayor.

CULTIVOS PRIMARIOS

A - Aislamiento del tejido
B - Disección/disgregación
C - Cultivo celular en recipiente

Obtención del órgano

Maceración y disgregación del
órgano, para obtener células

PREPARACIÓN DE CULTIVOS

CULTIVO SECUNDARIO


Si uno o varios tipos decélulas de un cultivo primario se
resiembra (sub-cultivo) el cultivo se denomina cultivo
secundario.



Las células pueden ser subcultivadas repetidamente
durante semanas o meses.

LÍNEAS ESTABLES



Se originan de un subcultivo o cultivo secundario.



Normalmente las líneas celulares tienen una vida finita, que
según el tipo de célula se puede prolongar de 20 a 100
generaciones, superado estelimite las células entran en
senescensia, en la que la célula pierde su capacidad de proliferar



Las líneas estables también se pueden obtener a partir de
subcultivos de tejidos tumorales.



Las células que pueden dividirse en forma indefinida como
resultado del cambio genético se dice que son inmortalizadas y
pueden propagarse como una línea celular continuas; las
cuales pueden mantenerse pormuchos años

Crecimiento de
CULTIVOS CELULARES

Monocapa:

•Se forma una capa de células
crecidas sobre una superficie
•Hay células que para crecer
necesitan una superficie de
adhesión
•Presentan una morfología de
fibroblasto o epitelial

Suspensión:

•Crecen en medio líquido
•Hematopoyéticas, células transformadas o de
tumores malignos
•Presentan una morfología redondeada

USOS DE LOS CULTIVOSCELULARES
•Fisiología celular: dinámica celular
•Estudios de citotoxicidad
•Estudio de alteraciones en cromosomas.
•Producción de vacunas.

•Ensayos de replicación viral
•Estudios de citoesqueleto

LÍNEAS CELULARES
Las líneas celulares son células estables, que por lo general son
de tipo tumoral las cuales se replican en forma constante y son
Inmortales. Ejemplos de líneas celulares:
•Vero:células de riñón de mono verde.
•Hela: células de cérvix de humano
•3T3: Fibroblasto de ratón
•RK13: Células de riñón de conejo

•PK15: Células de riñón de cerdo
•BHK: Células de riñón de hámster bebé

MATERIALES NECESARIO
Lugar
 Cuarto de cultivo
Equipo dentro del cuarto de cultivo
 Incubadora de CO2
 Campana de flujo laminar

Microscopio invertido
 Refrigerador
Materiales
 Medios de cultivoenriquecidos


AREA DE CULTIVO CELULAR
CUARTO DE CULTIVO

• Sin corriente de aire

• Filtros de aire
• Desinfecciones periódicas
• Luz UV en períodos de descanso
• El área, el equipo y materiales usados sólo deben
ser para cultivo celular

CUARTO DE CULTIVO

EQUIPO MÍNIMO REQUERIDO

Campanas de flujo laminar

Incubadoras

Campana de flujo laminar

INCUBADORA DE CO2

Microscopio invertidoCongeladores y contenedor
de nitrógeno líquido
- 196ª C

•Autoclave, horno pasteur y equipo de filtración
•Centrífugas, equipo para purificación de agua, balanzas,
potenciómetro (pH), pipeteador

BOTELLAS Y PLACAS DE CULTIVO

Medios de Cultivo comerciales
• Medio Basal de Eagle
• Medio Eagle Modificado por Dulbecco
(DMEM)
• RPMI 1640, etc.

*Cada línea celular tiene sus propios requerimientos...