Cultivo De Células Cerebrales

Obtención, cultivo y caracterización de células de Schwann: un modelo de terapia celular
Zayra Garavito, Constanza Martínez, Diany Calderón, Sonia Rahirant, María L. Caldas, Clara Spinel, Hernán Hurtado
Resumen
Numerosos estudios han demostrado que las células de Schwann son importantes para la regeneración del sistema nervioso. Esta célula produce una serie de moléculas que favorecen elcrecimiento de las fibras nerviosas. Estas moléculas pueden ser solubles como el NGF (Factor de crecimiento Nervioso), el LIF (Factor Inhibidor de la Leucemia), el BDNF (factor de crecimiento derivado del cerebro) y otros factores de crecimiento o moléculas asociadas con la adhesión celular como N-CAM (Molécula de Adhesión Neuronal), L1 y a la matriz extracelular, especialmente a la lámina basal comoel complejo proteoglicano-laminina. Estas características han permitido a los investigadores utilizar estas células para estimular la regeneración, tanto del sistema nervioso central (SNC) como del sistema nervioso periférico (SNP).
Dentro de la línea de investigación de regeneración y del sistema nervioso del Laboratorio de Neurociencias del Instituto Nacional de Salud, se han obtenido, cultivadoy caracterizado células de Schwann de ratón, rata y humano adultos, con el fin de desarrollar prótesis celulares que podrían soportar la regeneración. En este trabajo se muestran resultados obtenidos en el proceso de obtención, cultivo y caracterización de estas células.
La obtención, el cultivo y la caracterización se han realizado por diferentes metodologías. Para la obtención, hemos usado yestandarizado el cultivo a partir de dos fuentes de células, nervio periférico y ganglio tanto sensorial en el caso de ratón, como autonómico en el caso de células humanas. Estas técnicas nos han permitido obtener cultivos altamente enriquecidos en células de Schwann que en ratón alcanzan el 90%, en rata el 85% y en humano entre el 70-85%, determinados tanto por parámetros morfológicos comoinmunocitoquímicos. Estos parámetros inmunocitoquímicos incluyen la evaluación para marcadores tales como la proteína S-100 y GFAP (Proteína Glial Fibrilar Acida). Adicionalmente, se realizó la evaluación inmunocitoquímica para bromodeoxiuridina (BrdU) incorporada por células en su fase S, la cual nos permite obtener una aproximación del comportamiento proliferativo de los diferentes fenotipos celularespresentes en nuestros cultivos. Al realizar la cuantificación para la inmunodetección de BrdU incorporada, se encontró un índice de marcaje del 60 % en ratón, del 80% en rata y del 20 % en células humanas, relativo a la población de células de Schwann totales. Otro parámetro de caracterización ha sido la morfología, la cual se ha evaluado en cultivo por contraste de fase, en la que se puedeobservar la refringencia y la formación de estructuras a manera de rosarios, típicas de las células de Schwann en cultivo, en material fijado por microscopía de luz en donde se evidencia la inmunoreactividad para los diferentes marcadores y ultraestructuralmente por microscopía electrónica, en donde se han podido observar inclusiones de mielina, abundantes ribosomas libres, estructuras de endocitosis yretículo endoplásmico dilatado al parecer propio en cultivo entre otros detalles.
Así, las células de rata ya han sido utilizadas en implantes autólogos, en modelos de regeneración en nervio dentario y en nervio ciático crónicamente denervado. En el caso del nervio dentario en el que se aprovechó el canal intraoseo por el que se conduce el nervio a través de la mandíbula, para que funcionara comouna cámara de regeneración. En el caso del nervio ciático se utilizaron cámaras en las que se implantaron las células. En ambos casos el efecto de las células en la regeneración nerviosa está siendo actualmente evaluado.
Este trabajo de caracterización conducirá a la construcción “in vitro” de una prótesis celular con parámetros definidos, la que permitirá tener una mejor aproximación al...