cultivo de hongos

 PRACTICA N º 3
CULTIVO DE HONGOS
Introducción
La rama de la microbiología que estudia los hongos (reino Fungi) se conoce como la micología. Los hongos se clasifican en 4 grupos principales a base de su modo de reproducción sexual:
1.        Phycomycetes: mohos (“molds”) del agua, del pan yterrestres. Las
Esporas reproductivas son externas y descubiertas.
2.       Ascomycetes: levaduras (“yeast”) y mohos. Poseen esporas sexuales
Llamadas ascosporas. Estas se producen en sacos llamados ascos.
3.           Basidiomycetes: setas. Forman esporas reproductivas conocidas como
Basidio esporas en estructuras llamadas basidios.
4.            Deuteromycetes: También llamados hongosimperfectos porque no tienen
fase reproductiva sexual.
La asociación entre la densidad de hongos y las descargas orgánicas a cuerpos de agua o en el suelo, sugieren que los hongos pueden ser indicadores de contaminación. Desafortunadamente no se han identificado especies o grupos de hongos importantes en este rol. Algunas especies de levaduras y hongos filamentosos son características de aguascalientes y pueden ser indicadores útiles de contaminación termal.
La identificación de hongos es dependiente de la morfología (forma) de las colonias cuando se crecen en medio sólido, así como su crecimiento y morfología de estructuras reproductivas. Para la identificación de las levaduras es importante la actividad fisiológica en cultivos en el laboratorio.
Muestras:
1.    Envases: las muestras deagua o suelo se debe coleccionar en envase esterilizados con tapas. El transporte de los envases debe ser de forma derecha y deben descartarse luego de su uso. 2.    Almacenamiento: las muestras deben ser procesadas no más tarde de 24 horas de se recolección el campo. Si el análisis no se comienza prontamente, se deberán refrigerar.








Preparación y diluciones:
Una vezrecolectada las muestras en el campo se deben hacer diluciones de las mismas antes de sembrar en placas. Cuando se procesan muestras de agua de quebradas se deberá hacer diluciones de 1/10 de la muestra original. Para muestras de agua con gran material orgánico se deberán hacer diluciones de 1/100 o 1/1,000. Para muestras de suelo, utilizar diluciones de 1/1,000 o 1/10,000.
Para realizar diluciones delas muestras se deberá usar agua estéril y toda la cristalería también estériles.
Cultivo en placas:
Preparar placas para cada dilución a ser examinada. Transferir 10 ml de medio a 45 0C a placas petri de 9 cm. Añadir 1 ml de la muestra diluida y mezclar mediante rotación de la placa. Solidificar el agar lo más rápido posible. Tapar de inmediato las placas para evitar contaminación.Incubación:
Incubar las placas sin invertirlas a temperatura de salón (20-240C) en luz, pero evitar que sea directa. Examinar y contar las colonias en las placas luego de 3, 5 y 7 días.
Conteo e inventario:
El conteo de hongos en una placa proveerá la base para comparaciones cuantitativas entre muestras tomadas en distintas localidades. El inventario nos hablará de la abundancia de especies dehongos en la zona. Descartar placas con más de 300 colonias.
Se puede calcular el número de hongos por volumen de agua en las muestras y así comparar varios sitios muestreados.
# De hongos/ ml de muestra = suma del número de colonias en las 5 placas X dilución de una misma dilución
Para realizar un inventario se deberá utilizar el microscopio para ver morfología y estructuras reproductivasque ayuden en la clasificación de las especies.
AGAR SABOURAUD DEXTROSA
Este medio de cultivo es utilizado para cultivo de mohos y levaduras patógenas y no patógenas.


Composición
Digerido enzimático de caseína 10,0 g
Dextrosa 40,0 g
Agar 15,0 g
Agua destilada c.s.p. 1000 mL
pH final 5,6 ± 0,2
Preparación
Suspender 65 g de medio deshidratado en un litro de agua destila-da....