Cultivo de tejidos

OBTENCIÓN DE CALLOS IN VITRO A PARTIR DE RAÍZ DE ZANAHORIA (DAUCUS CAROTA)

RESUMEN
La embriogénesis somática es un proceso morfogenético de células somáticas totipotentes para desarrollar nuevos individuos a partir de la planta de procedencia El callo embriogénico es una estructura formada por tejido desdiferenciado y desorganizado del cual hay la potencial formación de embrionessomático. En el presente ensayo se utilizó explantes de zanahoria (Daucus carota) previamente desinfectados con detergente al 1%, cloro al 5% más 5 gotas de Tween 20 para ser sembrados bajo condiciones asépticas en medio MS suplementado con 3mg/L de 2,4-D, con la finalidad de inducir a la formación de callos. Los resultados obtenidos posterior a una semana de la siembra dejaron ver que el 70% presenta uncrecimiento bacteriano alrededor y sobre el explante de zanahoria utilizado por lo cual el ensayo fue descartado inmediatamente y reportados como frascos de cultivo contaminados.
Palabras clave: embriogénesis somática indirecta, callo, 2,4-D

INTRODUCCIÓN

Uno de los problemas en los cultivos de Daucus carota es que presenta una susceptibilidad al ser afectada por diversas enfermedades comola podredumbre negra que es causada por Stemphylium radicinum “hongo ascomiceto”, que produce oscurecimiento y muerte de las hojas y destrucción de la raíz; plagas como pulgón, gusanos grises, nematodos son otra fuente que causa enfermedades. Debido, a esto, ha llevado a la agricultura moderna a utilizar técnicas biotecnológicas que ayudan a evitar la susceptibilidad a las enfermedades ymejorar la productividad de las plantas, que resulta un método más eficiente, económico y rentable. (Martens, 2001)

Una de estas técnicas es el cultivo a partir del callo Un callo consiste de una masa amorfa surgida de la proliferación de células del parénquima. Frecuentemente es el resultado de una herida, se forma en el corte de un tallo o raíz. Los callos no tienen patrones predecibles deorganización, están presentes en centros localizados de actividad meristemática y a menudo aparecen en regiones cambiales rudimentarios con zonas de diferenciación vascular. Una de las características importantes del callo, desde un punto de vista funcional, es su irregular crecimiento, teniendo el potencial para desarrollar raíces normales, brotes y embriones que forman plántulas. (Martens, 2001). Dondela respuesta embriogénica del callo depende del genotipo de planta. (Litz, 1993)

El crecimiento de callo abarca una compleja relación entre el material usado para iniciar los callos, la composición del medio que es uno de los factores más importantes, y las condiciones experimentales durante el período de incubación. Los callos pueden ser amarillentos, blancos, verdes, o coloreados conantocianinas. La pigmentación será en todo el callo, o en algunas regiones sin pigmentar. Su anatomía, es de variación considerable a lo largo de la diferenciación celular. (Badillo, 2009)

En el presente laboratorio se trató de obtener tejido viable para la formación de callo en cultivo in Vitro de Daucus carota.



MATERIALES Y MÉTODOS

Recolección de muestra
La muestra fue obtenida deuna frutería de Sangolquí, se observo que esta esté sana y fresca y que no esté formado de tejido dañado o con alguna contaminación externa
Preparación de la sala de siembra
Se desinfectó el piso de la sala de siembra con Kalipto. Se limpiaron las cámaras de siembra con papel toalla estéril y alcohol al 90%. Se verificó la existencia de mecheros de alcohol, juego de pinzas y bisturí, papel toallaestéril, frascos de medio, botellas de agua estéril, frasco vacío, plástico adherente, ligas, y vasos de precipitación vacíos. Se prendió las lámparas UV de las cabinas de flujo durante 20 minutos y posteriormente se apagó para encender el flujo de aire durante 15 minutos.
Desinfección
El material vegetal se lavó en agua corriente para retirar toda la tierra e impurezas, luego se cortó los...