cultivo in vitro de embriones

2013

CULTIVO IN VITRO
DE EMBRIONES
Practica N°8 de Biotecnología Vegetal

Rosmery Cárdenas Hurtado
Universidad Católica Santa Maria
31/10/2013

[CULTIVO IN VITRO DE EMBRIONES]

31 de octubre de 2013

Practica N°8 Cultivo de Embriones
1. Objetivos:
 Comprender la técnica de cultivo in vitro de embriones.
 Establecer in vitro embriones de frutas cítricas.
 Evaluar larespuesta del explante en condiciones controladas in vitro.

2. Marco teórico
La embriogénesis somática consiste en la formación de embriones a partir de estructuras
de origen somático.
Células de naranjo obtenidas a partir de callo procedente de cotiledones 18
En los cítricos es fácil inducir embriogénesis somática in vitro a partir de callos
embriogénicos procedentes de tejidos nucelarespresentes en la semilla.
Para la obtención de los callos embriogénicos se emplearon cotiledones presentes en
plántulas procedentes se semillas germinadas in vitro (Apartado, 1.3.2) y se ensayaron los
siguientes medios de cultivo:
- UM5: MS con 5 mg/l de 2,4-D y 0,25 mg/l de Kinetina
- ½ MS-N: MS diluido a la mitad y 50 g/L de sacarosa; 0. 250 g/L de Extracto de malta y
Agar al 0.6%.
Los citricosrepresentan en volumen el principal producto fruticola a nivel mundial, con un
frutos total de 64,5 millones de toneladas para el periodo.
Aproximadamente 35%de la producción mundial (22 millones de toneladas) se utiliza para
la obetencion de productos derivados de los frutos frescos. Este cultivo es susceptible a
una serie de enfermedades, plagas y condiciones a diversas (edaficas, climaticas,etc.),
que afectan su rendimiento.
La embriogénesis somática, también denominada embriogénesis xual o adventicia, consiste
en el desarrollo de embriones a partir de células que no son el producto de una fusión de
gametos durante la fecundación o, en otras palabras, es un proceso por el cual se produce
una estructura bipolar (el embrión) a partir de una célula somática. Este proceso seproduce con cierta asiduidad en la naturaleza, ocurriendo de modo espontáneo en más de
60 familias de plantas, algunas tan importantes como las compuestas, crucíferas,
cucurbitáceas, gramíneas, rosáceas, leguminosas y palmáceas. Es pues un proceso tan
natural como la embriogénesis cigótica, con casos tan conocidos como el de los cítricos,
en los que ambos tipos de embriogénesis, la somática y lacigótica, ocurren casi
simultáneamente en el interior de la semilla.
Mediante cultivo in vitro, los primeros en obtener y desarrollar embriones somáticos
fueron Steward y Reinert en 1958 a partir de tejidos de zanahoria. A esta especie modelo
para el estudio de la embriogénesis somática se han añadido hasta la fecha más de 30
especies, algunas tan importantes como la alfalfa y varias leñosasforestales, las cuales en
la actualidad se propagan comercialmente mediante este método.
Se pueden obtener embriones somáticos de muy diversas partes de la planta, así se
pueden utilizar como explantos: ápices radiculares y caulinares, hipocótilos, pecíolos,
pedúnculos, hojas jóvenes y, en general, tejidos y órganos con características

Biotecnología Vegetal

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embrionarias, meristemáticas o reproductivas (embriones e inflorescencias inmaduras,
trozos de escutelo, nucela y endosperma, óvulos, entre otros).
Existen dos tipos de embriogénesis somática in vitro, la embriogénesis somática directa y
la indirecta. La forma directa implica la existencia de células somáticas predeterminadas a
seguir la vía embriogénicade desarrollo y las células del explanto primario se desarrollan
para formar embriones (como por ejemplo, la nucela de los cítricos). La forma indirecta
implica la necesidad de una inducción para que las células sigan la vía embriogénica, tras
pasar por una fase proliferativa (callo) y cambiar su competencia a la expresión de
embriogénesis. El proceso ocurre en dos etapas.

3. Materiales:...