Cultivo "in vitro"

“CULTIVO IN VITRO DE VIOLETA AFRICANA (Saintpaulia ionantha sp) ””

Introducción.
Cultivo de tejidos. Es una técnica que consiste principalmente en el cultivo de plantas o de partes de ellas llamados explantos, en los que se incluye a los protoplastos (células desprovistas de su pared celular), células, tejidos y órganos, proporcionándole de una forma artificial las condiciones físicas yquímicas apropiadas para que las células puedan expresar su potencial intrínseco o inducido. Además es necesario durante el proceso, efectuar la asepsia (esterilización) para mantener los cultivos libres de contaminación microbiana (Roca, 1993).
El cultivo de tejidos permite:
* Llevar a cabo investigaciones sobre organogénesis, embriogénesis, procesos bioquímicos y morfológicos de ladiferenciación celular (Roca, 1993).
* Propagación masiva de plantas, especialmente para especies de difícil propagación por otros métodos, o en vías de extinción.
* Clonación de indivios de características agronómicas deseables.
* Obtención de plantas libres de virus.
* Producción de semillas sintéticas.
* Conservación de germoplasma (conjunto de individuos que presentan la variabilidadgenética de una población vegetal).
* Obtención de metabolitos secundarios.
* Mejoramiento genético de plantas (incluyendo obtención de plantas transgénicas).
* Producción de nuevos híbridos.
* Germinación de semillas.
* Producción de haploides (Segretin).
En la actualidad, existen metodologías y medios de cultivo adecuados casi para cualquier tipo de especie vegetal.Composición del medio de cultivo.
1. Agua destilada. Representa el 95% del medio nutriente.
2. Fuente de carbono. Generalmente se usa sacarosa, ya que los explantos no se completamente autótrofos y no pueden cubrir sus necesidades con la fotosíntesis que pueden realizar in vitro.
3. Sustancias inorgánicas. Macroelementos (N, P, K, Ca, Mg, S) y microelementos (Fe, Co, Zn, Ni, B, Al, Mn, Mo,Cu, I), en una proporción adecuada según la planta elegida.
4. Vitaminas. Vitaminas B1, B2, B6, vitamina H, E, ácido fólico, ácido nicotínico, entre otras.
5. Reguladores de crecimiento. Auxinas. Promueven la elongación celular, la formación de callo y raíces adventicias, inhiben la formación de brotes axilares adventicios y, a veces, inhiben la embriogénesis. Citoquininas. Promueven ladivisión celular, regulan el crecimiento y el desarrollo de los tejidos vegetales. Otras giberelinas, ácido abscísico, etileno.
6. Mezclas de sustancias poco definidas. Extracto de levadura, extractos vegetales.
7. Materiales inertes. Se usan como soporte: agar, agarosa, otros polisacáridos, lana de vidrio, papel de filtro, arena (Segretin).
La formulación del medio cambia según se quieratener un tejido desdiferenciado (callo), crecer yemas y raíces, u obtener embriones somáticos para producir semillas artificiales, en otras palabras, dependiendo de lo que se quiera obtener serán las concentraciones a utilizar de los reguladores de crecimiento en el medio de cultivo, háblese de callo, brotes, raíz, flor, etc. En el medio de cultivo debe haber un pH adecuado para la absorción de losnutrientes por parte de la planta, el cual suele variar entre 5.5 y 6.5 (Pomar, 2002).
El fundamento teórico del cultivo in vitro es el concepto de la totipotencialidad celular, es decir, estas células tienen la capacidad de formar un organismo completo bajo condiciones adecuadas y si se le aplican estímulos adecuados. El éxito en la propagación de una planta dependerá de la posibilidad deexpresión de la totipotencialidad celular, esto es, que algunas células recuperen su condición meristematica. A tal fin, debe inducirse primero la desdiferenciación y luego la rediferenciación celular (Segretin).
La reproducción in vitro se aplica por dos vías principalmente: morfogénesis y embriogénesis somatica. En la primera se debe disponer de explantes, que provienen de la germinación de...