cultivo in vitro

Cultivo de tejidos vegetales, planificación, diseño y organización del flujo de trabajo.
El auge de la biotecnología vegetal viene como consecuencia del incremento de la población mundial, con el propósito de mejorar cultivares, adaptarlos a condiciones climáticas extremas, producción de alimentos y metabolitos de interés industrial. (Pérez Ponce, 1998).

Las aplicaciones que son resultadodel establecimiento in vitro de tejidos son: la propagación masiva de plantas, clonación de individuos con características agronómicas deseables, plantas libres de patógenos, mejoras genéticas, conservación de germoplasma vegetal, entre otras.

Para cumplir con los objetivos previamente planteados se han recurrido a técnicas como el cultivo de tejidos, que nos permiten mantener células in vitro demanera similar a sus propiedades y funciones in vivo. El cultivo de tejidos vegetales consiste esencialmente en aislar una porción de planta (explante) y proporcionarle artificialmente las condiciones apropiadas para que la célula expresen su potencial intrínseco en condiciones de asepsia.

Con la finalidad de establecer el cultivo ex situ se debe disponer de un laboratorio que cuenteprincipalmente con tres áreas:
1. Área de preparación de medios: Laboratorio general provisto de espacios para trabajos independientes o comunes, así como todo el equipo y material de uso común.
2. Área de manipulación aséptica del material vegetal.
3. Cuarto de cultivo: Área de mantenimiento de los cultivos bajo condiciones de luz, temperatura y humedad controladas.

Aunque estos son principiosbásicos en todos los laboratorios de cultivo de tejidos, su aplicación puede variar en magnitud y complejidad dependiendo de los objetivos del laboratorio. Suponiendo que se establecerá un laboratorio de tamaño medio, es equipo como:

AREA DE PREPARADO
AREA DE TRANSFERENCIA
CUARTO DE CULTIVO
Reactivos químicos
Campanas de Flujo Laminar
Estanterías de dimensiones variables
Material de Vidrio
LuzUV
Agitador orbital
Potenciómetro
Instrumental para campanas
Aire acondicionado
Parillas con agitación
Mecheros
Lámparas de luz blanca
Reactivos químicos
Alcohol
Gavetas
Autoclave


Lavadores, estanterías, etc.





Composición y preparación de medio de cultivo
Entre los factores más importantes a tener en cuenta para lograr la respuesta morfológica deseada en un cultivo detejido in vitro, es la composición del medio de cultivo, pues este le dará todos los nutrientes necesarios a un explante para inducir su crecimiento.

Existen distintas formulaciones para los medios de cultivo que se usan para el establecimiento in vitro de germoplasma vegetal. Los principales medios conocidos son Heller (1953, 1954), Murashige & Skoog (1962), Gamborg (1968 y 1970), Schenk &Hildebrandt (1972), De Fossard (1976).

Todas estas formulaciones varían en las concentraciones de compuestos tanto orgánicos como inorgánicos; sin embargo, de manera general todos los medios de cultivo utilizados para la multiplicación y conservación de tejidos vegetales se componen de los siguientes grupos:
Fuente de carbono. Generalmente, los tejidos vegetales in vitro no realizan lafotosíntesis, por lo que es necesario proveerlos de una fuente externa de carbono, que generalmente es Sacarosa, Glucosa, etc.
Sustancias inorgánicas. Este grupo se subdivide en Macroelementos como el N, P, K, Ca, Mg, S y los microelementos (Fe, Co, Zn, Ni, B, Al, Mn, Mo, Cu, I) en proporciones adecuadas para el correcto crecimiento celular.
Vitaminas.
Reguladores del crecimiento. Sustancias orgánicas quepromueven el crecimiento y división celular, y son determinantes para el crecimiento de un tejido vegetal, las cuales pueden ser auxinas, citocinas, giberelinas, ácido absícico, etileno.

Generalmente, la preparación del medio de cultivo se inicia preparando soluciones llamadas stock o madre, las cuales contienen concentraciones relativamente altas de una o más sales minerales (en función...