Cultivo

7.PROCEDIMIENTO
7.1 Proceso de descongelación
Si se desea trabajar con una línea celular determinada que se tiene conservada
congelada con nitrógeno líquido a -180ºC:
• Descongelar las célulasque están en viales de 1.3 ml de suero y un 10% de DMSO
en Baño maría a 37ºC. Procurar que las células permanezcan el menor tiempo
posible en contacto con el DMSO.
• Limpiar la superficie del vialcon etanol al 70%.
• Con ayuda de una pipeta pasar a falkon y añadir 4 ml de medio que debe estar a
37ºC, mezclar bien.
• Centrifugar a 800 rpm durante 3 a 4 minutos. Con esto estamos eliminando elDMSO que resulta muy tóxico para las células.
• Aspirar al vacío el medio con cuidado de no llevarnos parte del pellet y sin tocar
superficies.
• Añadir 9 ml de medio RPMI 1640 1% Glutamina, 1%Penicilina (100
U/ml)/Estreptomicina 100 μg/ml y 10% Suero bovino fetal y pasarlo a una placa o
flask. Si se trabaja con flask en lugar de placas tener en cuenta que existen flask
con tapón conmembrana y otros sin membrana, en ese caso, dejar la rosca del
tapón sin apretar para que pueda pasar algo de aire al cultivo celular.
• Incubar en estufa a 37º C, bajo una atmósfera de presión, y unaconcentración de
CO2 del 5%.
7.2 Mantenimiento del Medio
• Observar al microscopio la apariencia y el crecimiento de las células plasmáticas.
Deben ser refringentes y con una superficie biendelimitada y redondeadas. Según
el tipo de línea celular el modo de crecimiento es diferente, por ejemplo, las líneas
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MM1S y MM1R deben crecer semiadheridas a la superficie y no formando grumos,
RPMI8266 suele presentar un 30% de células con adherencia y crece mucho más
rápido que las anteriores, etc.
• Para el mantenimiento del cultivo celular realizar un cambio de dicho medio una vez
cada 2-3días en función de la densidad celular alcanzada en los recipientes de
cultivo y la apariencia del medio que pasa de color rosado-rojo, del rojo fenol pH
7.4 del medio RPMI, a un tono amarillento...