Cultivos celulares

TEMA 1 : INTRODUCCION A LOS CULTIVOS CELULARES. EL LABORATORIO DE CULTIVOS.

Acontecimiento para el desarrollo de cultivos celulares

Cultivos animales.

- Raux (1885): mantiene celulas embrionarias en solucion salina fuera del cuerpo animal

- Harrison (1907): inicio de los cultivos celulares. Desarrollo la tenica de la gota pendiente. Queria saber si las prolongaciones de lasneuronas eran prolongaciones o eran fusion de unas con otras. Empleo celulas espinales sobre un cubre objeto, le añade gota de unta y lo pone sobre un porta objeto. Lo puso en condiciones optimas de humedad y temperatura para observar al microscopio, vio que los cuerpos neuronales emitian prolongaciones.

- Carrel (1913). Desarrolla las tecnicas para evitar la contaminación del cultivo.(asepsia). Idea en un matraz (matraz de carrel) base donde se pegan las celulas y donde va el caldo de cultivo. Ademas tiene un cuello tumbado para evitar entrada de particulas. Consiguió cultivos de larga duracion. Fue importante porque aun no existia nisiquiera los antibioticos. Llego a mantener un cultivo durante 34 años. Propicio idea erronea sobre los cultivos in Vitro. Se creia que cualquiercultivo animal podria vivir indefinidamente, siempre y cuando tuviera alimentos y buenas condiciones. Sucedió asi pork empleaba celulas indefinidass, se produciria reinoculacion con el mismo que añadia a los cultivos.

- Enders (1949). Replica el virus de la polio en celulas de mamifero. Fue importante para desarrollar la 1º vacuna contra la polio. (por salk).

- Gey (1952). Obtienecultivo de celulas Hela, son humanas y crecen indefinidamente, en cultivo. Su origen fue un carcinoma cervical de Herniela Lal. Fue la primera liena de celulas humanas empleadas.

- Leli Montalchini (1954). Descubre el factor de crecimiento nervioso para mantener neuronas en cultivo y por tanto que estas produjeran neuritas.

- Eagle (1955). Estudio sistemático de los requerimiento paracelulas en cultivo con crecimiento in Vitro. Desarrolla el primer medio ensencial minimo de Eagle, que aun hoy se usa en algunos cultivos.

- 1969-1970: la vida media de las celulas humanas en cultiva era finita. May Flick y morread tran un numero limitado de generaciones las celulas se mueren. Surgen los medios de selecion, para seleccionar determinadas celulas.

- El medio HAT(hidroxantina-, timidina-), se consiguieron relaizar fusiones celulas interespecificas. Ej: celulas humanas – celulas raton, pertio asignar genes a cromosomas para asigna su localizacion cromosomita y da lugar a hibridomas.

- 1970-1980:

- 1975: consiguen los hibridomas, pueden proceder de cultivos monoclonales, otro producto extraido de cultivos celulares.

- Surge el ADN recombinante,la tegnologia; producción de moleculas de interes, (bacterias, insulina, eucariotas, activador del plasminógeno y eritropoyetina). Inicialmente se desarrolla en bacterias , d donde se obtiene la insulina, 1º como producto de uso humano (1982). Se queria emplear esta tegnologia par obtener mas proteinas para uso humano. Problema es que las proteinas tienen tratamiento postraduccionales que lasbacterias no pueden hacer (glicosilaciones). Se emplea la tecnica en levaduras . problema es que la modificacion postransduccional diferente puede obtener problemas de inmunocidad (porque las proteinas son diferentes). La cantidad de glicosilaciones es menor, pueden producir proteinas no funcionales. Se emplearon cultivos de mamiferos para hacer esto. Principalmente se emplea la linea 6H0, se usa paraobtener proteinas recombinantes de uso humano. 1º activador del plasminógeno (1986) y 2º Eritropoyetina, obtenido ambos en eucariotas.

- Actualmente esta area esta en desarrollo. Las celulas en cultivo van secretando al medio liquido los productos de interes, por lo que la purificación es mas facil (en celulas mamiferos) que en bacterias, donde quedan dentro de agregados.

- En...