Cultivos celulares

Introducción a los Cultivos Celulares

100 años de Cultivos Celulares

Un poco de historia
• 1880-1910: Primeros ensayos de sobrevida de células fuera de organismos enteros (Roux, Haberlandt, etc.) • 1907: El zoólogo americano R.G. Harrison es considerado el iniciador de los cultivos de tejidos animales.
– Fue el primero que empleó técnicas in vitro para el estudio de fenómenos in vivo,realizando cultivos de médula espinal embrionaria de anfibios. Pudo observar el crecimiento de los axones de los neuroblastos, y estableció que el axón se formaba por expansión a partir del cuerpo neuronal y no por fusión de una cadena de células. El cultivo se realizaba en una gota de linfa del anfibio que colgaba de un cubreobjetos sobre una cámara sellada. 100 años de Cultivos Celulares

Unpoco de historia
• • 1920-1940: Se establecen líneas celulares de diversos órganos animales 1940-1955:
– Se replican virus sobre células cultivadas – Se producen las primeras vacunas virales en cultivos celulares – Se definen las condiciones para congelar células en nitrógeno líquido (Alan Parks, 1949) – Se establece la línea HeLa (1ª de origen humano, 1952) – Se desarrollan los primeros medios decultivo químicamente definidos – Se cultivan las primeras células de insectos

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Un poco de historia
• 1960’s: Se desarrollan las técnicas de hibridización en cultivos • 1970’s:
– Los cultivos celulares se incorporan a la ingeniería genética – Desarrollo de grandes reactores de cultivos en suspensión

• Reciente:
– Modificación genética controlada decélulas – Desarrollo de medios de cultivo libres de suero – Desarrollo de medios de cultivo libres de componentes animales

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Cultivos celulares • Propagación de células fuera del organismo de origen • Pueden ser de origen vegetal o animal, y dentro de éstas, pueden provenir de distintos tejidos de vertebrados o invertebrados • Los cultivos celulares producen clones,por lo que todas las células de un cultivo poseen el mismo genotipo, excepto que se produzcan mutaciones durante el proceso

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¿Para qué cultivar células in vitro ?

• Investigación
– Comprender la fisiología celular – Toxicología, virología, etc.

• Ingeniería de tejidos
– Piel, hígado – Hueso y cartílago

• Producción de biológicos
– – – – Anticuerposmonoclonales Hormonas (FSH) Enzimas Vacunas virales (polio, aftosa, parvo, moquillo, etc.)

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Ventajas
• Un solo tipo bien definido de células en cada cultivo • Fácil de manipular, condiciones controladas • Establecimiento de líneas internacionales de fácil acceso • Alternativa al uso de animales
– Sistema para estudiar principios fisiológicos – Chequeo posterioren un número reducido de animales

• Pueden obtenerse grandes cantidades de células • Permite trabajar en pequeña, media y gran escala • Las células pueden mantenerse congeladas por largos períodos de tiempo con mínima pérdida de viabilidad
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Sin embargo... • Cuidado que no son animales enteros
– Las células no están organizados en verdaderos tejidos – No hayinterrelación con otros tejidos – El comportamiento es distinto a la organización tridimensional

• El entorno es distinto • Las condiciones de crecimiento son distintas • Las conclusiones de los ensayos deben ser debidamente acotadas
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Componentes de un cultivo

CÉLULAS

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Tipos de cultivo
• Cultivo primario: células,tejidos u órganos tomados directamente de un animal. • Cultivo de órganos, explantes: mantenimiento de órganos o parte de órganos in vitro. • Cultivo de tejidos: mantenimiento de tejidos in vitro. • Cultivo de células: mantenimiento de células dispersas. • Líneas celulares: células mantenidas por subcultivos sucesivos comenzando por un cultivo primario. • Cultivos continuos: células que han logrado...