cultivos celulares

Los cultivos celulares y sus aplicaciones I (cultivos de células animales)
Lic. María Eugenia Segretín
INGEBI-CONICET - Dpto. FBMyC, FCEyN-UBA
Los científicos han desarrollado metodologías para aislar células y obtener poblaciones celulares
homogéneas, que luego pueden ser incluso mantenidas y multiplicadas in vitro (“en vidrio” = en
recipientes especiales, en el laboratorio). Los cultivoscelulares son esenciales en la investigación
científica, ya que permiten estudiar los procesos que ocurren en las células, y en diversas aplicaciones
de la biotecnología, como la producción de moléculas de interés industrial, ingeniería de tejidos, etc.
¿Cómo se obtienen las células?
El primer paso para aislar células de un mismo tipo a partir de un tejido (generalmente formado por
células dediversos tipos) consiste en separar la matriz extracelular que las mantiene unidas 1. Para
lograrlo, la muestra de tejido es tratada con diversas enzimas proteolíticas (como tripsina y
colagenasas) que degradan las proteínas de la matriz; y también se utilizan agentes (como el EDTA ácido etilendiaminotetraacético) que secuestran al ión calcio, del cual depende la adherencia celular.
De estaforma, y mediante una suave agitación, se obtiene una suspensión celular que contiene a
todas las células presentes en ese tejido.
Para separar los diferentes tipos celulares se pueden
utilizar varios métodos:
1. La centrifugación, que permite separar a las células
por tamaño.
2. La capacidad de adherencia al vidrio o al plástico
que tienen algunos tipos celulares.
3. La unión a ciertosanticuerpos específicos para
determinados
componentes
celulares.
Estos
anticuerpos se usan unidos a diferentes matrices
(colágeno, bolitas de polisacáridos, de látex o de
plástico). Las células unidas a la matriz (a través de
los anticuerpos) se recuperan por agitación,
tratamiento con tripsina (digiere a las proteínas que
median la adhesión) o, en el caso de una matriz
digerible (como elcolágeno), degradando la propia
matriz con enzimas (como la colagenasa).
4. La unión a ciertos anticuerpos acoplados a
colorantes fluorescentes. Las células que contienen
un determinado componente son reconocidas y
“marcadas” por los anticuerpos. Las células
marcadas son separadas de las no marcadas en un
separador de células activado por fluorescencia o
cell sorter (Figura 1).
5. Ladisección de un grupo de células a partir de una
sección de tejido preparada para microscopía. La Figura 1. Equipo para la separación de
región que contiene las células de interés es células marcadas por fluorescencia. Las
irradiada con un láser, que funde un pequeño células individuales viajan a través de un
conducto muy delgado y son iluminadas por un
círculo con las células que están por debajo.Estas
láser. El equipo puede detectar qué células
células capturadas son luego removidas para un emiten fluorescencia (por el anticuerpo
posterior análisis. La técnica, denominada adherido). Cada célula es incorporada en una
“microdisección de captura por láser”, puede gota que es “cargada” eléctricamente como
utilizarse para aislar y estudiar diferentes partes de negativa o positiva enfunción de la presencia o
un tumor, por ejemplo. Otra técnica relacionada ausencia del colorante fluorescente. Luego, las
emplea un láser para disectar un grupo de células y gotas son separadas por un campo eléctrico
“catapultarlas” a un contenedor apropiado para un hacia los recipientes colectores según su carga
(adaptado de Alberts y col., MBC 2002).
posterior análisis (Figura 2).
1

Lamatriz extracelular está compuesta por diferentes tipos de moléculas, entre las que se encuentran los proteoglicanos,
polisacáridos como el ácido hialurónico, y proteínas como el colágeno, laminina, fibronectina, fibrina y elastina.

Figura 2. Técnica de microdisección para aislar células a partir de secciones de tejidos. Este método
emplea un láser para escindir una región de interés y...