cultivos celulares
Páginas: 59 (14749 palabras)
Publicado: 23 de febrero de 2015
Documento de Aplicación
C U L T I V O S
C E L U L A R E S
www.cultek.com
Cultivos Celulares
www.cultek.com
Índice de materias: CULTIVOS CELULARES
• Introducción a los cultivos celulares.
8 Conceptos actuales de cultivo celular.
8 Tipos de cultivos de tejidos.
8 Biología de la célula en cultivo.
• El medio de cultivo.
8 El sustrato de cultivo.
8 La fase gaseosa.
9Oxígeno.
9 Dióxido de carbono.
8 Propiedades físicas.
9 pH y capacidad tamponadora.
9 Osmolaridad
9 Temperatura
9 Viscosidad
9 Tensión superficial
8 Condiciones fisiológicas.
• Las contaminaciones.
8 Contaminación bacteriana y por levaduras.
8 Contaminación por micoplasmas.
8 Contaminación por virus.
• Técnicas de contaje celular.
• Métodos de disgregación celular.
8 Mecánicos.
8Químicos.
8 Enzimáticos.
• El laboratorio de cultivo celular.
8 Cabinas de flujo laminar.
8 Incubadores.
8 Incubador de CO2.
8 Incubadores tipo "roller".
8 Instrumentos ópticos de observación: microscopio de contraste de fases invertido.
8 Congeladores e instalación de criogenia (depósito de N2 líquido).
8 Equipo de esterilización.
9 Equipo de filtración.
9 Autoclave.
9 Mechero Bunsen
8 Otrosinstrumentos.
9 Centrífugas.
9 Contador electrónico de células ("cell counter").
9 Equipo de purificación de agua.
9 Pipeteadores.
• Productos
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Cultivos Celulares
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Introducción a los cultivos celulares.
Introducción histórica
El cultivo de tejidos se desarrolló a partir de los últimos años del siglo XIX como una continuaciónde las técnicas de la
embriología. Wilhem Roux mantuvo en el año 1885 células de embrión de pollo en solución salina durante unos días. El zoólogo
americano R.G. Harrison es considerado el iniciador de los cultivos de tejidos animales, en 1907.
Harrison fue el primer autor que empleó técnicas in vitro para el estudio de fenómenos in vivo, realizando cultivos de médula
espinal embrionaria deanfibios. Pudo observar el crecimiento de los axones de los neuroblastos, y estableció que el axón se
formaba por expansión a partir del cuerpo neuronal y no por fusión de una cadena de células. El cultivo se realizaba en una
gota de linfa del anfibio que colgaba de un cubreobjetos sobre una cámara sellada.
La primera limitación para el establecimiento de cultivos era lograr un medio nutritivoadecuado. Burrows (1910) empleó
plasma de pollo para nutrir los explantes de tejidos embrionarios de pollo. Este medio se reveló mucho mejor que los
anteriormente probados, lo que le permitió observar el crecimiento del tejido nervioso, corazón y piel.
Burrows y Carrel realizaron los primeros intentos de establecer cultivos de células de mamífero, y consiguieron mantener
explantes obtenidos apartir de perros, gatos y conejos de indias, así como en el crecimiento de tumores sólidos. Demostraron
que la vida del cultivo se puede prolongar mediante subcultivo. Los medios empleados fueron plasma suplementado con
extractos de embrión.
Roux y Jones (1916) emplearon por vez primera extractos enriquecidos en tripsina para disociar las células de embriones de
pollo, estableciendo elprimer cultivo celular. Uno de los mayores problemas que describen para el establecimiento de los
cultivos celulares es la aparición de múltiples contaminaciones, por lo que desarrollaron numerosos métodos de manipulación
en condiciones de asepsia que aún hoy día se utilizan.
En 1913 Carrel demostró la posibilidad de mantener en cultivo células extraídas de un animal, embrión de pollo, durante unperiodo de tiempo superior al de la vida de éste. Mantuvo en cultivo células de pollo durante 34 años (Sharp, 1977). Gran parte
del éxito en el mantenimiento de los cultivos se debió al desarrollo del denominado frasco de Carrel.
Entre los años 1920 y 1940 se desarrollaron diferentes estrategias de obtención de cultivos y de mantenimiento de las
condiciones estériles, pero sin grandes...
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Índice de materias: CULTIVOS CELULARES
• Introducción a los cultivos celulares.
8 Conceptos actuales de cultivo celular.
8 Tipos de cultivos de tejidos.
8 Biología de la célula en cultivo.
• El medio de cultivo.
8 El sustrato de cultivo.
8 La fase gaseosa.
9Oxígeno.
9 Dióxido de carbono.
8 Propiedades físicas.
9 pH y capacidad tamponadora.
9 Osmolaridad
9 Temperatura
9 Viscosidad
9 Tensión superficial
8 Condiciones fisiológicas.
• Las contaminaciones.
8 Contaminación bacteriana y por levaduras.
8 Contaminación por micoplasmas.
8 Contaminación por virus.
• Técnicas de contaje celular.
• Métodos de disgregación celular.
8 Mecánicos.
8Químicos.
8 Enzimáticos.
• El laboratorio de cultivo celular.
8 Cabinas de flujo laminar.
8 Incubadores.
8 Incubador de CO2.
8 Incubadores tipo "roller".
8 Instrumentos ópticos de observación: microscopio de contraste de fases invertido.
8 Congeladores e instalación de criogenia (depósito de N2 líquido).
8 Equipo de esterilización.
9 Equipo de filtración.
9 Autoclave.
9 Mechero Bunsen
8 Otrosinstrumentos.
9 Centrífugas.
9 Contador electrónico de células ("cell counter").
9 Equipo de purificación de agua.
9 Pipeteadores.
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Introducción a los cultivos celulares.
Introducción histórica
El cultivo de tejidos se desarrolló a partir de los últimos años del siglo XIX como una continuaciónde las técnicas de la
embriología. Wilhem Roux mantuvo en el año 1885 células de embrión de pollo en solución salina durante unos días. El zoólogo
americano R.G. Harrison es considerado el iniciador de los cultivos de tejidos animales, en 1907.
Harrison fue el primer autor que empleó técnicas in vitro para el estudio de fenómenos in vivo, realizando cultivos de médula
espinal embrionaria deanfibios. Pudo observar el crecimiento de los axones de los neuroblastos, y estableció que el axón se
formaba por expansión a partir del cuerpo neuronal y no por fusión de una cadena de células. El cultivo se realizaba en una
gota de linfa del anfibio que colgaba de un cubreobjetos sobre una cámara sellada.
La primera limitación para el establecimiento de cultivos era lograr un medio nutritivoadecuado. Burrows (1910) empleó
plasma de pollo para nutrir los explantes de tejidos embrionarios de pollo. Este medio se reveló mucho mejor que los
anteriormente probados, lo que le permitió observar el crecimiento del tejido nervioso, corazón y piel.
Burrows y Carrel realizaron los primeros intentos de establecer cultivos de células de mamífero, y consiguieron mantener
explantes obtenidos apartir de perros, gatos y conejos de indias, así como en el crecimiento de tumores sólidos. Demostraron
que la vida del cultivo se puede prolongar mediante subcultivo. Los medios empleados fueron plasma suplementado con
extractos de embrión.
Roux y Jones (1916) emplearon por vez primera extractos enriquecidos en tripsina para disociar las células de embriones de
pollo, estableciendo elprimer cultivo celular. Uno de los mayores problemas que describen para el establecimiento de los
cultivos celulares es la aparición de múltiples contaminaciones, por lo que desarrollaron numerosos métodos de manipulación
en condiciones de asepsia que aún hoy día se utilizan.
En 1913 Carrel demostró la posibilidad de mantener en cultivo células extraídas de un animal, embrión de pollo, durante unperiodo de tiempo superior al de la vida de éste. Mantuvo en cultivo células de pollo durante 34 años (Sharp, 1977). Gran parte
del éxito en el mantenimiento de los cultivos se debió al desarrollo del denominado frasco de Carrel.
Entre los años 1920 y 1940 se desarrollaron diferentes estrategias de obtención de cultivos y de mantenimiento de las
condiciones estériles, pero sin grandes...
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