Cultivos Primarios y Caracterizacion Citogenetica
Páginas: 12 (2798 palabras)
Publicado: 19 de abril de 2011
SEDE MEDELLIN
Resumen
El cultivo de linfocitos T a partir de sangre periférica se utiliza para obtener el número, morfología de los cromosomas y cariotipo, lo que es de suma importancia en el momento de realizar analisis a la persona donadora de la sangre y efectuar estudios sobre citogenetica, para obetener dichos resultados es necesario cultivar, cosechar, fijar, gotear, teñir y observarla muestra de manera correcta, dando como producto unos resultados confiables, el desarrollo de esta actividad posibilita hallar el indice mitotico y la obtencion de fotografias de los cromosomas extendidos para su posterior analisis.
Palabras clave: Sangre, linfositos, cultivo, cosecha, fijar, goteo, teñir, cromosomas, bandas, contaminacion, cariotipo
Abstract
The cultivation of Tlymphocytes from peripheral blood were used to obtain the number, chromosome morphology and karyotype, which is of paramount importance in the time of the individual analysis of the blood donor and perform cytogenetic studies, to obtain these results is necessary to cultivate, harvest, post, dripping, stain and observe the sample properly, leading to product reliable results, the development of thisactivity makes it possible to find the mitotic index and obtaining photographs of the chromosome extended to further analysis.
Key words: Blood lymphocytes, cultivation, harvesting, post, drip, dye, chromosomes, bands, pollution, karyotype, mitotic index, nuclear assets, mitosis
1. INTRODUCCIÓN
En los últimos años del siglo XIX, se desarrollo el cultivo de tejidos, en el año 1885 selogro mantener células de embrión de pollo en solución salina durante unos días, y durante los siguientes años se logró un avance significativo en el campo científico alcanzando no solo las condiciones requeridas para cada cultivo, si no también mantener líneas celulares durante largos periodos de tiempo. En los últimos años la aplicación de la tecnología del cultivo celular ha permitido grandesavances en la comprensión de los mecanismos implicados en los procesos intracelulares e intercelulares con el establecimiento de co-cultivos.
Actualmente se entiende por cultivo celular al conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de las células 'in vitro', manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas. El cultivo celular se realiza en medios artificialespreparados mediante la mezcla de componentes purificados o de soluciones orgánicas complejas, en el interior de instrumentos que mantienen las condiciones físico-químicas adecuadas y sobre soportes o recipientes que los contienen y aíslan del medio exterior.
El extraer linfocitos T y someterlos a diversos procedimientos como el bandeo R-replicativo, se realiza mediante el uso de pulsos terminalesde un análogo a la timidina, el 5-Bromo2´-deoxiuridina (BrdU) para determinar la cronología de la duplicación del genoma a través de la fase S. Mediante esta técnica la fase S se subdivide en estadios replicativos y se establece que el estadio III de replicación genera un patrón de bandas R-replicativas que corresponde al reverso de las bandas G. El tiempo de aplicación de BrdU, varía según laduración del ciclo celular y espera marcar las células que estén pasando o vayan a pasar por la fase S desde su adición. Durante la fase S la cadena se separa para duplicarse y es ahí donde el BrdU se incorpora en los sitios correspondientes a la T, ya que su concentración en el medio de cultivo es mucho mayor que la de la base nitrogenada producida por la célula.
Por medio de la técnica de Giemsaes también posible establecer a través de una tinción diferencial, la determinación de zonas con altas concentraciones de ADN y los enlaces Adenia- Timina, lo cual facilita el proceso de observación de los núcleos en el microscopio; para finalmente determinar la cantidad de mitosis presentes y por ende observar los 23 pares cromosómicos existentes en la muestra.
Con este trabajo se pretende...
Resumen
El cultivo de linfocitos T a partir de sangre periférica se utiliza para obtener el número, morfología de los cromosomas y cariotipo, lo que es de suma importancia en el momento de realizar analisis a la persona donadora de la sangre y efectuar estudios sobre citogenetica, para obetener dichos resultados es necesario cultivar, cosechar, fijar, gotear, teñir y observarla muestra de manera correcta, dando como producto unos resultados confiables, el desarrollo de esta actividad posibilita hallar el indice mitotico y la obtencion de fotografias de los cromosomas extendidos para su posterior analisis.
Palabras clave: Sangre, linfositos, cultivo, cosecha, fijar, goteo, teñir, cromosomas, bandas, contaminacion, cariotipo
Abstract
The cultivation of Tlymphocytes from peripheral blood were used to obtain the number, chromosome morphology and karyotype, which is of paramount importance in the time of the individual analysis of the blood donor and perform cytogenetic studies, to obtain these results is necessary to cultivate, harvest, post, dripping, stain and observe the sample properly, leading to product reliable results, the development of thisactivity makes it possible to find the mitotic index and obtaining photographs of the chromosome extended to further analysis.
Key words: Blood lymphocytes, cultivation, harvesting, post, drip, dye, chromosomes, bands, pollution, karyotype, mitotic index, nuclear assets, mitosis
1. INTRODUCCIÓN
En los últimos años del siglo XIX, se desarrollo el cultivo de tejidos, en el año 1885 selogro mantener células de embrión de pollo en solución salina durante unos días, y durante los siguientes años se logró un avance significativo en el campo científico alcanzando no solo las condiciones requeridas para cada cultivo, si no también mantener líneas celulares durante largos periodos de tiempo. En los últimos años la aplicación de la tecnología del cultivo celular ha permitido grandesavances en la comprensión de los mecanismos implicados en los procesos intracelulares e intercelulares con el establecimiento de co-cultivos.
Actualmente se entiende por cultivo celular al conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de las células 'in vitro', manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas. El cultivo celular se realiza en medios artificialespreparados mediante la mezcla de componentes purificados o de soluciones orgánicas complejas, en el interior de instrumentos que mantienen las condiciones físico-químicas adecuadas y sobre soportes o recipientes que los contienen y aíslan del medio exterior.
El extraer linfocitos T y someterlos a diversos procedimientos como el bandeo R-replicativo, se realiza mediante el uso de pulsos terminalesde un análogo a la timidina, el 5-Bromo2´-deoxiuridina (BrdU) para determinar la cronología de la duplicación del genoma a través de la fase S. Mediante esta técnica la fase S se subdivide en estadios replicativos y se establece que el estadio III de replicación genera un patrón de bandas R-replicativas que corresponde al reverso de las bandas G. El tiempo de aplicación de BrdU, varía según laduración del ciclo celular y espera marcar las células que estén pasando o vayan a pasar por la fase S desde su adición. Durante la fase S la cadena se separa para duplicarse y es ahí donde el BrdU se incorpora en los sitios correspondientes a la T, ya que su concentración en el medio de cultivo es mucho mayor que la de la base nitrogenada producida por la célula.
Por medio de la técnica de Giemsaes también posible establecer a través de una tinción diferencial, la determinación de zonas con altas concentraciones de ADN y los enlaces Adenia- Timina, lo cual facilita el proceso de observación de los núcleos en el microscopio; para finalmente determinar la cantidad de mitosis presentes y por ende observar los 23 pares cromosómicos existentes en la muestra.
Con este trabajo se pretende...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.