Cultivos

Modelo estándar de preparación de los medios de cultivo

1. Se disuelve la cantidad el medio que aconseje los manuales de microbiología, del medio que se va a fabricar en el volumen de agua destilada que nos indiquen. La disolución se debe hacer calentando y agitando al mismo tiempo, cuando se trata de un medio sólido o semisólido hasta que se disuelva por completo. Si el medio fueralíquido una fuerte agitación sería suficiente.
2. Se esteriliza el medio de cultivo a esterilización en autoclave, el tiempo va en función del volumen, ej. Para un litro de medio, se necesitan aproximadamente 20’ a 120 grados
3. Los medios se trasladan a un medio estéril para irlos enfriando lentamente y añadirle s procede los suplementos: sangre, antibióticos, vitaminas, etc. A una temperaturaque oscila entre 45 y 50 grados.
4. Se dosifica el medio de cultivo ( de 45 a 50 grados, en el tipo de envase que se vaya a requerir en condiciones asépticas)
Preparación de algunos medios de cultivos más comunes

El medio base utilizado con mayor frecuencia para la fabricación de agar sangre, es el que se comercializa con el nombre de T.S.A (agar soja triptasa).
El agar sangre, es unmedio enriquecido, la suplementación del medio con un 6% de sangre proporciona un mejor crecimiento a los microorganismo exigentes, así como la obtención de reacciones hemolíticas de lo estreptococos.
Composición por litro de agar sangre
* Digestivo pancreático de caseína 15g
* Peptona de soja 5g
* Cloruro sódico 5g
* Agar 15g
pH= 7’3 +- 0’5
Ideal a 7’3 a 7’5
E digestivopancreático contenido en la fórmula aporta al medio un elevada proporción de proteínas, que unida a la base nutritiva de la peptona de soja, hacen que el medio sea lo suficiente rico en nutrientes, como para que exista un buen desarrollo de los microorganismos más exigentes. El cloruro sódico hace que se mantenga el equilibrio osmótico
Preparación del agar sangre

1. Se disuelven 40g en unlitro de agua destilada, calentando y agitando hasta disolver por completo
2. Se esteriliza en autoclave a 120 grados, entre 15’ a 20’.
3. Se enfría el medio y cuando adquiere una temperatura entre 45 y 50 grados se añaden de forma aséptica aproximadamente un 5% de sangre de cordero.
4. Se mezcla bien y se solidifica en una placa de petri, a un volumen de 20 ml por placa. El mediopreparado en placa tiene una duración de dos meses a una temperatura de 4 y 8 grados.
Agar chocolate

Es un medio enriquecido que se utiliza para procedimientos cualitativos como el aislamiento y cultivo de microorganismos exigentes ej. Haemophilus.
Composición por litro
* Digestivos pancreático de caseína 7’5g
* Peptona de carne 7’5g
* Almidón de maíz 1g
* Fosfato dipotásico 4g* Fosfato monopotasico 1g
* Cloruro sódico 5g
* Agar 15g
pH = 7’3 +- 0’2
La peptona así como el digestivo pancreático aportan al medio nutrientes nitrogenados, los fosfatos, sirven para mantener el pH y el almidón de maíz, neutraliza ácidos tóxicos.
Preparación del agar chocolate

1. Se disuelven 41g del medio, en un litro de agua destilada calentándola y agitándola hasta quese disuelva por completo.
2. Se esteriliza en autoclave a 120 grados, aproximadamente durante 15 ‘a 20’.
3. Se enfría el medio hasta llegar a 80 grados de temperatura, se añade en condiciones asépticas un 10 % de sangre de carnero (se libera el factor X que es la hemoglobina), se agita hasta que el medio tome color chocolateado. Después se enfría de 45 a 50 grados y se añade el factor Vque es el NAD.
4. Se mezcla y se dosifica en una placa de petri, a un volumen de 20 mL por placa. El medio preparado en placa perfectamente embolsado, tiene una duración de 2 meses a una temperatura de 4 a 8 grados. Este factor X y V, son indispensables para el crecimiento del microorganismo Haemophilus.
Agar Mc Conkey

Es un cultivo diferencial, recomendado para el aislamiento y...