CURVA DE CALIBRACIÓN POR FOTOCOLORÍMETRIA

ACTIVIDAD CATALÍTICA DE LA AMILASA SALIVAL.
Informe de laboratorio.

OBJETIVOS:
Experimentar sobre diferentes aspectos de la actividad enzimática.
Comprender la forma como diversos factores influyen sobre la actividad catalítica de las enzimas.
Evaluar la dependencia que puede presentar una reacción enzimática con respecto a la acidez del medio, a la temperatura y a la concentración de laenzima.
METODOLOGÍA.
La metodología de la práctica se muestra a continuación en forma de diagramas.
2.1 PREPARACIÓN DE SOLUCIÓN DE AMILASA SALIVAL
.

Diagrama 1. Obtención de solución de amilasa salival a partir de la saliva de algún miembro del grupo en concentraciones 1/5, 1/25 1/50.

Nota: Los colores utilizados en el trazo de los diagramas no representan el verdadero color de losreactivos, estos solo son usados para diferenciar una sustancia de otra.


3. RESULTADOS Y PREGUNTAS

3.1 Para la sección “2.2: EVALUACIÓN DEL CAMBIO DE pH SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA AMILASA”, se obtuvieron los siguientes datos:

TUBO
Ph
Buffer (ml)
NaCl (ml)
Almidón (ml)
Amilasa (ml)
Lugol
Intensidad de color
1
3
4
2
4
1
1 gota
Azul oscuro(1)
2
5
4
2
4
1
1gota
Ligero naranja(7)
3
7
4
2
4
1
1 gota
Transparente- ligero amarillo(8)
4
7.5
4
2
4
1
1 gota
Transparente (10)
5
8
4
2
4
1
1 gota
Violeta muy claro(9)
6
9
4
2
4
1
1 gota
Violeta Transparente(8)
7
10
4
2
4
1
1 gota
Violeta claro(7)
8
blanco
4 (ml)
2
4
1
1 gota
Azul oscuro (0)
Tabla 1: datos, Evaluación del cambio de pH sobre la actividad de laenzima amilasa, los números representan la intensidad del color siendo 0 el color que obtuvo el tubo 8 (azul más oscuro) y 10 el valor de la mayor transparencia obtenida (tubo 4).

3.1.2 Preguntas y respuestas.

3.1.2.1 ¿En qué rango de pH trabaja mejor la enzima amilasa?

La enzima amilasa trabaja mejor en un rango de pH que viene desde el 5 hasta el 9, siendo así el rango 7±2 puntos de pH,sin embargo de acuerdo a los resultados obtenidos la enzima trabaja mejor en medios ligeramente básicos cercanos al 7.5.

3.1.2.2 ¿Cuál es su pH óptimo?

De acuerdo a los resultados obtenidos en la práctica, el pH óptimo para la muestra de amilasa salival es de 7.5, cabe recordar que este valor varía dependiendo de los hábitos del donante.

3.1.2.3 Gráfica de “Intensidad del color azul vs.pH” para la enzima.
Anexo 1

3.1.2.4 ¿Cuál será a funcionalidad del tubo N º 8?

El tubo número ocho tiene como finalidad ser el valor de referencia con el que se compara los otros, pues como en este no había amilasa se espera que la reacción de hidrolisis de la amilosa no se dé, con lo cual la solución permanecerá de un color azul intenso a partir del cual se compararían los colores de lasotras muestras.

3.1.2.5 ¿Puede explicar a qué se debe la formación del color azul en algunos de los tubos?

En algunos tubos se formaba un complejo coloreado azul dado a que la amilasa por las condiciones de pH específicas de estos tubos no lograba llevar a cabo o por lo menos no de manera completa la hidrolisis de la amilosa por lo cual seguía habiendo formación de complejo amilasa Iodo, decoloración azulosa.

3.1.2.6 ¿Por qué razón el experimento hay que repetirlo hasta que no aparezca el color azul en el tubo de prueba?

Inicialmente se espera que en el tubo de pH 7 la reacción de hidrolisis se dé completamente, pues se cree que es el pH ideal para la enzima, con lo cual si en este tuvo todavía hay coloración azul (la reacción no se ha dado al ciento por ciento), con muchamás razón habrá coloración en los otros tubos pues sus pH no dejan que la reacción en su totalidad, así que habrá que esperar hasta que por lo menos el tubo con pH “ideal” teórico complete la reacción, para así poder llevar a cabo la comparación.


3.2 Para la sección “2.3: EVALUACIÓN DEL CAMBIO DE CONCENTRACIÓN DE LA ENZIMA SOBRE LA REACCIÓN DE HIDROLISIS DE LA AMILOSA”, se obtuvieron los...