CURVA DE CALIBRACIÓN PROTEÍNAS

CURVA DE CALIBRACIÓN PROTEÍNAS
Laboratorio N°2 Determinación de proteínas.
OBJETIVO: Determinar la concentración de proteínas (mg% p/v) de una muestra.
Existen diversos métodos analíticos paradeterminar la concentración de proteínas en solución. El método
a usar depende de (1) la concentración de proteínas de la muestra problema, (2) la cantidad de muestra
disponible y (3) si se desearecuperar o no la muestra (método destructivo versus no-destructivo). La
siguiente tabla muestra los métodos espectrofotométricos comúnmente usados en investigación para la
determinación de proteínas ensolución y algunas de sus características:
Método
Lowry
Bradford
Absorción UV
Turbidimétrico
Biuret

Rango
5,0 – 100 ug/ml
0,0 – 50 ug/ml
0,1 – 0,6 mg/ml
0,1 – 3,0 mg/ml
0,5 – 10 mg/ml ( nm )
720
595
280
540
540

carácter destructivo
si
si
no
si
si

A continuación se proporcionan antecedentes y protocolos para dos de los métodos más usados en
Bioquímica:
MÉTODO DEBIURET. El compuesto químico denominado Biuret (NH2-CO-NH-CO-NH2) origina un
complejo de color violeta al reaccionar sulfato de cobre (CuSO 4), a pH básico. Así, todo compuesto que
seaestructuralmente similar a Biuret dará una reacción positiva (reacción de Biuret); por ejemplo, las
proteínas con sus enlaces peptídicos formarán un complejo organometálico coloreado entre el ión cúprico
y elgrupo -NH del enlace peptídico (los aminoácidos y los dipéptidos no forman complejos coloreados,
con excepción de histidina, serina y treonina). Los iónes amonio y la urea interfieren en la reaccióndando
“falsos positivos”. En las muestras biológicas, prácticamente no hay otras sustancias, fuera de las
proteínas, que den positiva la reacción de Biuret, de modo que este método se puede utilizarpara la
determinación cuantitativa de proteínas en solución, en el rango de concentración de 0,5-10 mg de
proteínas por ml de solución problema.
REACTIVOS. Reactivo de Biuret: sulfato de cobre;...