curva de calibracion

Introducción. Fundamento: La curva de calibración se utiliza para determinar la concentración de una sustancia en una muestra problema siempre que se cumpla la ley de Lambert-Beer. En todos loslaboratorios se realizan curvas de calibración con una prioridad que está establecida en la rutina de trabajo y que depende del control de calidad interno.
Una curva de calibración es larepresentación gráfica en un eje de coordenadas de la absorbancia frente a la concentración. El método de trabajo consiste en realizar distintas diluciones de la sustancias que queremos analizar partimento deuna concentración conocida (ej. un patrón o estándar a diversas diluciones) y determinamos sus absorbancias a cada dilución. Los valores obtenidos se trasladan a la gráfica y se obtienen unos puntos apartir de los cuales se traza la curva de calibración que debe ser rectilínea. Cuando trabajamos con una muestra problema su absorbancia se traslada la muestra lo que nos permite conocer suconcentración.
En las determinaciones espectrofotométricas debemos conocer un parámetro denominado linealidad que es el intervalo de concentración de las sustancias entre las cuales existe una relación linealentre la concentración y la absorbancia, lo que se conoce como ley de Lambert-Beer. Cuando la concentración de la sustancia en la disolución sobrepase los límites de la linealidad, esta ley deja dcumplirse y la gráfica dejara d ser una recta para convertirse en una curva; en estas situaciones hay que diluir la muestra para que su concentración este dentro de los límites de linealidad y luegomultiplicad el resultado por el factor de dilución.
Observaciones: en el punto en el que la curva deja de ser recta es donde se establece el índice de linealidad.
Materiales y reactivos: gradilla, 5tubos de ensayo, rojo ponceau diluido (patrón), agua destilada (para diluciones y medir blanco), pipetas pasteur o de vidrio, espectrofotómetro, cubetas de espectrofotómetro y la muestra problema...