Curva De Calibracion
Páginas: 6 (1362 palabras)
Publicado: 8 de marzo de 2013
CURVA DE CALIBRACION.
Informe de laboratorio.
UNIVERSIDAD NACIONAL
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
ESCUELA DE QUIMICA
2012
OBJETIVOS
1. Aprender a aplicar la técnica de fotocolorimetría en un compuesto.
2. Calcular la absorbancia de una proteína para determinar su concentración.
3. Realizar una curva decalibración con una solución patrón.
METODOLOGIA.
1) Funcionamiento del fotocolorímetro.
El equipo se enciende de la parte de atrás y se va escuchar un sonido detrás de cual el equipo comenzara a revisar el estado de todas sus funciones. Luego de insertar el blanco en el interior se calibrara con absorbancia en cero y se comenzara con las demás muestras paradeterminar su absorbancia a determinada longitud de onda.
2) Determinación del espectro de absorción de la albumina.
A un tubo de ensayo se le agregan 4 ml de solución de albumina mas 1 ml de reactivo de Biuret agitar y esperar ½ hora a un cambio de color.
En dos celdas del fotocolorímetro agregar hasta la mitad de estas en una agua destilada que será el blanco y en otra lasolución de albumina coloreada.
Calibrar el fotocolorímetro a una ג 420 nm con el blanco ajustando en absorbancia cero.
Colocar la celda con la solución de albumina y registrar su absorbancia (repetir este paso aumentando de 20 en 20 la longitud de onda hasta 640 nm ) tomar los datos obtenidos en la tabla N°1.
3) Preparación de curva de calibración de laalbumina
Preparar 10 tubos rotulados (según indica la Tabla N° 2 )
En el fotocolorímetro seleccionar la longitud de onda que obtuvo mayor absorbancia en el procedimiento 2 y ajustar con el blanco en absorbancia cero y tomar la absorbancia de cada tubo.
Calcular la concentración de la albumina en cada uno de los tubos (menos en los tubos 7,8 y 9), con la fórmula dedilución y registrar en la tabla N°2 los resultados obtenidos.
DATOS.
|ג (nm) |ABSORBANCIA |
|420 |0.107 |
|440 |0.098 |
|460 |0.117 |
|480 |0.150 |
|500 |0.195 |
|520 |0.230|
|540 |0.240 |
|560 |0.234 |
|580 |0.208 |
|600 |0.166 |
|620 |0.139 |
Tabla N°1. Determinación del espectro de absorción de la albumina
| | | | || | |
|TUBO |SOLUCION PATRON|SOLUCION PROBLEMA(ml)|SOLUCION |REACTIVO DE |ABSORBANCIA |CONCENTRACION |
| |(ml) | |SALINA(ml) |BIURET(ml) | |(gr/ml) |
|BLANCO | | |2.0|4 | | |
|1 |0.1 | |1.9 |4 |0.213 |6,6 x10^-5 |
|2 |0.3 | |1.7 |4 |0.011 |2 x10^-4 |
|3 |0.5 ||1.5 |4 |0.030 |3,3 x10^-4 |
|4 |0.7 | |1.3 |4 |0.118 |4,6 x10^-4 |
|5 |0.9 | |1.1 |4 |0.176 |6 x10^-4 |
|6 |1.2 |...
Informe de laboratorio.
UNIVERSIDAD NACIONAL
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
ESCUELA DE QUIMICA
2012
OBJETIVOS
1. Aprender a aplicar la técnica de fotocolorimetría en un compuesto.
2. Calcular la absorbancia de una proteína para determinar su concentración.
3. Realizar una curva decalibración con una solución patrón.
METODOLOGIA.
1) Funcionamiento del fotocolorímetro.
El equipo se enciende de la parte de atrás y se va escuchar un sonido detrás de cual el equipo comenzara a revisar el estado de todas sus funciones. Luego de insertar el blanco en el interior se calibrara con absorbancia en cero y se comenzara con las demás muestras paradeterminar su absorbancia a determinada longitud de onda.
2) Determinación del espectro de absorción de la albumina.
A un tubo de ensayo se le agregan 4 ml de solución de albumina mas 1 ml de reactivo de Biuret agitar y esperar ½ hora a un cambio de color.
En dos celdas del fotocolorímetro agregar hasta la mitad de estas en una agua destilada que será el blanco y en otra lasolución de albumina coloreada.
Calibrar el fotocolorímetro a una ג 420 nm con el blanco ajustando en absorbancia cero.
Colocar la celda con la solución de albumina y registrar su absorbancia (repetir este paso aumentando de 20 en 20 la longitud de onda hasta 640 nm ) tomar los datos obtenidos en la tabla N°1.
3) Preparación de curva de calibración de laalbumina
Preparar 10 tubos rotulados (según indica la Tabla N° 2 )
En el fotocolorímetro seleccionar la longitud de onda que obtuvo mayor absorbancia en el procedimiento 2 y ajustar con el blanco en absorbancia cero y tomar la absorbancia de cada tubo.
Calcular la concentración de la albumina en cada uno de los tubos (menos en los tubos 7,8 y 9), con la fórmula dedilución y registrar en la tabla N°2 los resultados obtenidos.
DATOS.
|ג (nm) |ABSORBANCIA |
|420 |0.107 |
|440 |0.098 |
|460 |0.117 |
|480 |0.150 |
|500 |0.195 |
|520 |0.230|
|540 |0.240 |
|560 |0.234 |
|580 |0.208 |
|600 |0.166 |
|620 |0.139 |
Tabla N°1. Determinación del espectro de absorción de la albumina
| | | | || | |
|TUBO |SOLUCION PATRON|SOLUCION PROBLEMA(ml)|SOLUCION |REACTIVO DE |ABSORBANCIA |CONCENTRACION |
| |(ml) | |SALINA(ml) |BIURET(ml) | |(gr/ml) |
|BLANCO | | |2.0|4 | | |
|1 |0.1 | |1.9 |4 |0.213 |6,6 x10^-5 |
|2 |0.3 | |1.7 |4 |0.011 |2 x10^-4 |
|3 |0.5 ||1.5 |4 |0.030 |3,3 x10^-4 |
|4 |0.7 | |1.3 |4 |0.118 |4,6 x10^-4 |
|5 |0.9 | |1.1 |4 |0.176 |6 x10^-4 |
|6 |1.2 |...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.