Curva de crecimiento bacteriano
Páginas: 5 (1081 palabras)
Publicado: 4 de julio de 2010
2/23/2010
Curva de Crecimiento bacteriano
Bacterias
Células procariotas Organismos más antiguos Presentes en todas partes Extremadamente pequeños
Profa. Maria M. Meléndez Ortega Laboratorio Destrezas II
Tamaño de las Bacterias
Ente 500 y 2000nm
Escherichia coli
La bacteria más utilizada Genoma completamente codificado
Presente en el intestino humano El tiempo de generación20 minutos en condiciones favorables Luego de casi 7 horas
http://static.howstuffworks.com/gif/cell‐ecoli.gif
1 célula puede dar origen a 1 millón de células
1
2/23/2010
Cómo se dividen las células procariótas
Cuando las bacterias y otros organismos unicelulares entran en división celular hacemos referencia a crecimiento celular. El incremento en la cantidad celular en lugar deltamaño de la célula individualmente, es crecimiento. La proporción a la cual las células bacteriales se dividen en un cultivo es influenciado por varios factores
Dependiendo de los genotipos, diferentes cadenas bacterianas pueden crecer a diferentes velocidades en un medio de cultivo particular. El crecimiento celular bacteriano posee unas características sumamente importantes, las mismas son lassiguientes:
Para una transformación eficiente y reproducible de E. coli po un plásmido recombinante. Es importante que por n ecombinante impo tante q e las células puedan ser preparadas y recolectadas en un punto específico en el crecimiento, a una concentración celular particular. E. coli es más receptiva a infección por bacteriófagos durante un cierto periodo de crecimiento. El rendimientomayor de células o proteínas recombinantes puede ser adquirido durante una etapa particular del crecimiento celular.
Nivel de nutrientes disponibles Temperatura de incubación Grado de aeración.
Un procedimiento común para determinar la proporción de crecimiento celular es el iniciar con un volumen de medio definido (50 a 100ml) que contenga un inoculo (1ml) de células de un cultivo líquido quese ha sido desarrollado la noche previa. El cultivo es luego incubado a una temperatura y aeración adecuada (37°C a 225 rpm). ( p ) A diferentes tiempos, la muestra de cultivo es retirada y se le determina la densidad óptica (OD). Luego de esto se realiza una curva de crecimiento para determinar las fases distinguibles del ciclo de crecimiento.
Fase Fase Fase Fase lag exponencial estacionaria demuerte. El punto al cual el cultivo es inoculado es considerado como tiempo cero.
Curva de Crecimiento bacteriano
2
2/23/2010
Curva de Crecimiento bacteriano
Cultivos bacterianos
Velocidad de crecimiento no constante
El objetivo principal de esta experimentación
Reconocer e identificar las fases de crecimiento bacteriano. Como actividad de aplicación se desarrollaran dos curvasde crecimiento de diferentes cadenas de E. coli, en este proceso se pretende determinar el efecto en el tiempo de crecimiento al utilizar diferentes genotipos en el bacterianos.
*Menor crecimiento *Pocas células dividiéndose *Tiempo de división rápido
Procedimiento:
Día previo a la experimentación
Cultivar en 2 ml de LB las bacterias a ser estudiadas. Dejar crecer las mismas poraproximadamente 16 horas a 37ºC con un movimiento constante de 225rpm 225rpm.
En este caso estaremos realizando la curva de crecimiento bacteriano para dos tipos de células de diferentes compañías, las JM109 y las DH5 αlpha. El grupo se dividirá en dos equipos de trabajo, cada uno realizará la curva de crecimiento para la cepa asignada.
Día de la experimentación
Preparar los tubos de cultivo siguiendola indicaciones de la tabla:
Grupo de trabajo 1 Cepas DH5 Grupo de trabajo 2 Cepa JM109 Blanco
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 1
Tubo 2
Control
25ml LB + 50µl células
24.5ml LB + 250µl células
25ml LB + 50µl células
24.5ml LB + 250µl células
25 ml LB
3
2/23/2010
Remover asépticamente 1ml de cada uno de los cultivos y colocarlos en la cubeta para medir la densidad...
Curva de Crecimiento bacteriano
Bacterias
Células procariotas Organismos más antiguos Presentes en todas partes Extremadamente pequeños
Profa. Maria M. Meléndez Ortega Laboratorio Destrezas II
Tamaño de las Bacterias
Ente 500 y 2000nm
Escherichia coli
La bacteria más utilizada Genoma completamente codificado
Presente en el intestino humano El tiempo de generación20 minutos en condiciones favorables Luego de casi 7 horas
http://static.howstuffworks.com/gif/cell‐ecoli.gif
1 célula puede dar origen a 1 millón de células
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2/23/2010
Cómo se dividen las células procariótas
Cuando las bacterias y otros organismos unicelulares entran en división celular hacemos referencia a crecimiento celular. El incremento en la cantidad celular en lugar deltamaño de la célula individualmente, es crecimiento. La proporción a la cual las células bacteriales se dividen en un cultivo es influenciado por varios factores
Dependiendo de los genotipos, diferentes cadenas bacterianas pueden crecer a diferentes velocidades en un medio de cultivo particular. El crecimiento celular bacteriano posee unas características sumamente importantes, las mismas son lassiguientes:
Para una transformación eficiente y reproducible de E. coli po un plásmido recombinante. Es importante que por n ecombinante impo tante q e las células puedan ser preparadas y recolectadas en un punto específico en el crecimiento, a una concentración celular particular. E. coli es más receptiva a infección por bacteriófagos durante un cierto periodo de crecimiento. El rendimientomayor de células o proteínas recombinantes puede ser adquirido durante una etapa particular del crecimiento celular.
Nivel de nutrientes disponibles Temperatura de incubación Grado de aeración.
Un procedimiento común para determinar la proporción de crecimiento celular es el iniciar con un volumen de medio definido (50 a 100ml) que contenga un inoculo (1ml) de células de un cultivo líquido quese ha sido desarrollado la noche previa. El cultivo es luego incubado a una temperatura y aeración adecuada (37°C a 225 rpm). ( p ) A diferentes tiempos, la muestra de cultivo es retirada y se le determina la densidad óptica (OD). Luego de esto se realiza una curva de crecimiento para determinar las fases distinguibles del ciclo de crecimiento.
Fase Fase Fase Fase lag exponencial estacionaria demuerte. El punto al cual el cultivo es inoculado es considerado como tiempo cero.
Curva de Crecimiento bacteriano
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2/23/2010
Curva de Crecimiento bacteriano
Cultivos bacterianos
Velocidad de crecimiento no constante
El objetivo principal de esta experimentación
Reconocer e identificar las fases de crecimiento bacteriano. Como actividad de aplicación se desarrollaran dos curvasde crecimiento de diferentes cadenas de E. coli, en este proceso se pretende determinar el efecto en el tiempo de crecimiento al utilizar diferentes genotipos en el bacterianos.
*Menor crecimiento *Pocas células dividiéndose *Tiempo de división rápido
Procedimiento:
Día previo a la experimentación
Cultivar en 2 ml de LB las bacterias a ser estudiadas. Dejar crecer las mismas poraproximadamente 16 horas a 37ºC con un movimiento constante de 225rpm 225rpm.
En este caso estaremos realizando la curva de crecimiento bacteriano para dos tipos de células de diferentes compañías, las JM109 y las DH5 αlpha. El grupo se dividirá en dos equipos de trabajo, cada uno realizará la curva de crecimiento para la cepa asignada.
Día de la experimentación
Preparar los tubos de cultivo siguiendola indicaciones de la tabla:
Grupo de trabajo 1 Cepas DH5 Grupo de trabajo 2 Cepa JM109 Blanco
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 1
Tubo 2
Control
25ml LB + 50µl células
24.5ml LB + 250µl células
25ml LB + 50µl células
24.5ml LB + 250µl células
25 ml LB
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Remover asépticamente 1ml de cada uno de los cultivos y colocarlos en la cubeta para medir la densidad...
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