curva de crecimiento E.Coli

Nombre de la asignatura
Nombre de la unidad
Nombre de la práctica
Resultado del aprendizaje

Materiales

Medios de cultivo

Equipos
Material proporcionado por el
alumno

Microbiología AplicadaAislamiento de microorganismos de interés biotecnológico
Curva de crecimiento de E. coli
Determinación del crecimiento bacteriano mediante turbidimetria y obtención de
la curva de crecimiento.
Cultivo de E.coli incubado de 18 a 24 hrs en caldo LB
17 tubos de ensayo con tapadera
2 pipetas de 5 o 10 mL
25 puntas para micropipetas de 1 ml (azules)
10 puntas para micropipetas de 200 µl (amarillas)Micropipeta para 1 ml y 200 µl
Matraz Erlemeyer de 250 mL
Mechero
2 vasos de precipitados (para desecho de puntas)
Gradilla
Probeta de 100 mL
Agitador magnético
Papel aluminio o papel estraza
Cinta testigoCeldas para espectrofotómetro
Algodón, o paño suave para limpiar celdas
Agua destilada
Caldo LB (Luria-Bertani)
Balanza analítica
Parrilla de calentamiento
Autoclave
Campana de flujo de aire laminarEspectrofotómetro
Guantes
Cubreboca
Marcador
Procedimiento

Día 1. Preparación del material
! Preparar 100 mL de caldo LB
! Distribuir 5 mL en los 17 tubos (16 tubos para la curva de crecimiento y 1 tubopara el cultivo inicial).
! Esterilizar medio de cultivo y puntillas para micropipetas
Día 2. Inoculación de E. coli .
! Inocular la cepa de E. coli. Tomar una pequeña porción con el asabacteriológica y adicionar a un tubo con
5 mL de cultivo LB estéril (Cultivo inicial). Incubar a 37 0C por 18-24 hrs.
! Marcar los tubos (por duplicado) con los minutos correspondientes: 0, 60, 120, 180, etc. Unduplicado será
utilizado como blanco para la lectura al espectrofotómetro.

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Día 3.
Antes de iniciar:
! Encender el espectrofotómetro 15 minutos antes.
! Preparar material para lectura alespectrofotómetro: celdas, puntillas azules, vaso de precipitados para
desechos, algodón, agua destilada.
Parte 1.
! Transferir asépticamente 50 µl del cultivo inicial de E. coli a los 16 tubos y mezclar...