Curvas De Calibracion Dns, Bradford y Almidon

CURVA PATRON PARA LA DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES, PARA LA DETERMINACION DE PROTEINAS Y LA DETERMINACION DE ALMIDON

Marco Teórico

Uno de los mayores beneficios de la microbiología se ha evidenciado en la producción y purificación de metabolitos camibar por un sinónimo producidos por los microorganismos, que han generado productividad en los diversos campos bio-industriales. Entreestos, se encuentran microorganismos productores de enzimas como proteasas, amilasas, lipasas, y productos antimicrobianos, entre otros. (ojo revisar si tiene ref) Para la determinación de estas actividades, son utilizadas técnicas colorimétricas para la cuantifiación de que cuantifican los diferentes productos que se generan. Para ello se realizan Con ello realizamos la curvas patrón, las cualesse definen como una representaciones gráficas curva de referencia construidas con cantidades conocidas de una sustancia,y que se utiliza para determinar la cantidad de esta sustancia en una muestra desconocida. Y Un ejemplo de esto es la cuantificación de azucares reductores en la producción de amilasas cuyo producto de degradación es la glucosa y la maltosa dependiendo de las enzimasproducidas(1) importante todas estas referencias van así grandes no como esa pequeñita .(1) Existen varios métodos para la cuantificación de este tipo de compuestos, que se fundamentan en técnicas colorimétricas, entre las cuales se encuentran la técnica de DNS, Somogyi Nelson o de reacciones que generan visibilidad por color como lo es la aplicación de lugol para observar halos transparentes en presenciade hidrólisis.

También se generan unas reacciones enzimáticas que son mas especificas y pueden detectar productos específicos y no azucares reductores generalizados.(2) Sin embargo, el método más utilizado es la técnica DNS, la cual consiste en la reacción generada por el extremo reductor del azúcar frente el acido 3,5-dinitrosalíicilico y su conversión en acido 3-amino-5-nitrosalicilico yácido D-glucónico. Esta reacción genera que el color amarillo del 3,5-dinitrosalicilico se convierta en color rojo ladrillo.(1) Para seguir el protocolo descrito por Miller(4) se debe conocer la composición de DNS que está dada por fenol, bisulfito de sodio, hidróxido de sodio, sal de Rochelle y ácido 3,5-dinitrosalicilico. Para generar la reacción es necesario que la mezcla entre el reactivo y elazúcar reductor se lleve a cabo mediante el calentamiento de la muestraun choque térmicodurante en el cual se procede 5 minutos en un recipiente con agua hirviendo para permitir la apertura de la molécula en forma de anillo y dejar el extremo reductor expuesto para la reacción. Luego se establece el choque térmico sumergiendo la muestra durante 5 minutos en hielo para detener tal reacción y finalmentees leído por medio de espectrofotometría a 540nm.(4)

El análisis cuantitativo de las proteínas se realiza principalmente por métodos colorimétricos y por espectrofotometría.(10) Las mediciones de cantidades precisas de proteínas en solución es necesaria para el estudio de muchos procesos bioquímicos. En la actualidad hay muchos procedimientos disponibles para determinar la cantidad de proteínaen solución, dentro de los que se incluyen el ensayo de Biuret, el ensayo de Lowry, BCA y el ensayo de Bradford (Azul brillante de Coomassie G-250), estas técnicas son relativamente simples y selectivas lo que permite la obtención de resultados adecuados y fácil manejo en el laboratorio.(11) Por su parte el método de Bradford se ha utilizado desde hace muchos años y aún mantiene las mismascaracterísticas en términos de procedimientos, además se ha aplicado en diferentes ámbitos de estudios ambientales, estudios de composición de proteínas en alimentos, en investigación médica, y en otros campos.(11) El colorante utilizado en este método es el azul de coomassie. La técnica se fundamenta en la capacidad de este colorante para formar complejos con proteínas utilizando interacciones...