Degradación de columna

1



2

HILIC
cromatografía líquida de interacción
hidrofílica

Fase
normal

Fase
inversa

carbohidratos,
amino ácidos,
péptidos y
metabolitos

Pavel Jandera
OrgánicosAcuosos

HIC
Cromatografía líquida de
interacción hidrofóbica

Biopoliméros

3

Fase inversa
• Separaciones polares
• Fase estacionaria: No polar
• Fase móvil: mezcla de solvente polar + agua(o buffer)
• Alta retención en fase estacionaria
• A mayor hidrofobicidad, menor concentración de solvente

orgánico.
• Nota: Solutos polares se retienen menos que los No

polares.

4Fase normal
• Utiliza generalmente >50% de solvente orgánico
• Altas eficacias de separación que la simple fase inversa.
• Excelente estabilidad
• Mecanismo de retención por competencia de adsorciónentre el analito y la fase móvil.

5

Generalidades
• Un analito debe:
• ser solubles en o tienen una afinidad por la fase estacionaria de la

columna y la fase móvil .
• Rendimientocromatográfico General y el factor de retención , o ( k )

este parámetro crítico puede ser optimizado para influir en la
separación cromatográfica.

=

donde;
a

T

Rs

=

• Encondiciones HILIC los compuestos más polares tendrán una

interacción más fuerte con esta fase estacionaria polar y los factores
de retención de estos compuestos se incrementará.

6

HILIC
Eficienciasde
separación

Detección: por
acoplamiento
directo a MS o
MS/MS

Posible
acoplamiento
directo a RMN
con disolventes
deuterados

7

Silica gel
Tipo de Partículas
• Precipitación desilicatos en medio alcalino
• Agregación por método sol-gel
• Hidruros de sílice

El mecanismo de retención en la fase móvil se da por:
- Absorción
- Intercambio iónico
Dependientes de:
- Lanaturaleza de del analito
- La composición de la fase móvil

C
o
n
t
a
m
i
n
a
c
i
ó
n

c
o
n
m
e
t
a
l
e
s

8

NOTA: Las posibilidades de separación se amplían cuando...