DEMOSTRACIÓN DE LA NATURALEZA PROTEICA DE LA ENZIMA CATALASA EN LOS VEGETALES

DEMOSTRACIÓN DE LA NATURALEZA PROTEICA DE LA ENZIMA

CATALASA EN LOS VEGETALES

INTRODUCCION.

Las enzimas son proteínas altamente especializadas que tienen un papel muy importante en la vida celular, pues van a catalizar en forma muy ordenada las cientas de reacciones biológicas, se encuentran entre las más notables de las biomoléculas conocidas debido a su extraordinaria especificidad y a supoder catalítico.
La actividad de algunas enzimas depende realmente de su estructura como proteínas, la especificidad de reacción implica que una enzima cataliza solo una de las varias modificaciones que pueden ocurrir sobre un sustrato.
Las reacciones más simples como son la “autolisis” de los tejidos animales, de considerable interés para la industria alimenticia, en lo que se refiere alablandamiento de la carne durante el sazonado, son catalizadas por las catepsinas, las cuales se liberan y activan luego de ocurrida la muerte. El efecto acelerador es uno de los mas altos que se conocen, multiplica la velocidad de reacción hasta en un millón de veces.
Las enzimas son proteínas que contienen los mismos aminoácidos que se encuentran en otras proteínas. Al igual que otras proteínas tambiéntienen una estructura tridimensional, que representa la conformación de contenido de energía mínima, y pueden consistir de una sola o de varias cadenas polipeptídicas.
El cambio en la cantidad de moles o gramos de material inicial o de los productos de la reacción por unidad de tiempo es denominado como velocidad de reacción.

El objetivo del presente experimento es evidenciar que las enzimas sonproteínas que gozan de las propiedades de estas y que son sensibles a todos los órganos físico – químico que actúan sobre los mismos, haciendo variar su comportamiento y actividad.

OBJETIVOS.

- Obtener un extracto crudo de la enzima catalasa.
- Demostrar cualitativamente el efecto de ácidos, bases y sales sobre la actividad de la catalasa.

REACTIVOS, MATERIALES Y EQUIPO.

- Reactivos:
•Hidróxido de Sodio 1N
• Ácido Clorhídrico 5N
• Ácido Tricloroacético 20%
• Sulfato de Cobre 20%
• Buffer Fosfato 0,05M y 0,1M pH = 6,5
• Agua Oxigenada 3%
• Cloruro de Sodio 0,15M

- Materiales:
• Tomates Verdes (inmaduros)
• Papas Verdes (inmaduros)
• Manzanas Verdes (inmaduros)
• Tubos de Ensayo
• Pipetas de 5 y 10 ml
• Gasa
• Embudo
• Matraces de 50 ml
• Morteros

- Equipos:
• Congeladora
• Centrífuga• Estufa

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.

OBTENCIÓN DEL EXTRACTO CRUDO

1. Pelamos los tomates, cortamos en pequeños trozos y homogenizamos en el mortero.
2. Adicionamos 3ml de buffer
3. Filtramos el extracto crudo a través de 2 tapas de gasa y centrifugamos a 10000 g por 15 minutos y guardamos los alimentos a –18 °C.

DEMOSTRACIÓN DE LA NATURALEZA PROTEICA

1.- Armamos el Siguiente Sistema:|COMPONENTE |I |II |III |IV |V |VI |
|Enzima |1,0 |1,0 |1,0 |1,0 |1,0 |1,0 |
|NaOH 1N
| |2,4 | | | | |
|HCl 0,5N | | |2,4 | | | |
|A.T.A. 20% | | | |2,4 | | |
|CuSO4 20% | | | | |2,4 | |
|Buffer Fosfato 0,05M ph= 6,5 | | | | | |2,4 |

2. Dejamos en Reposo los 6 tubos durante 20 minutos a 30 °C.
3.- Luego se prepara el Siguiente Sistemas:

|COMPONENTE |I |II |III |IV |V |VI |
|Buffer Fosfato 0,05M ph= 6,5|2,0 |2,0 |2,0 |2,0 |2,0 |2,0 |
|NaCl 0,15M |1,0 |1,0 |1,0 |1,0 |1,0 |1,0 |
|H2O2 3% |1,0 |1,0 |1,0 |1,0 |1,0 |1,0 |

4. Se incuba por 2 minutos a 25 °C, luego se agrego a cada uno de los tubos 1ml de la enzima tratada en el paso 1.
5. Dejamos en incubación durante 2 minutos a 25 °C y determinar la actividad enzimática cualitativamente de la sgte. manera:
• Presencia de la actividad enzimática:Formación de Gas.
• Ausencia dela actividad enzimática: Ausencia de Gas.

DISCUSIÓN.

- Las oxido reductasas son enzimas que catalizan reacciones de transferencias de electrones; es decir de oxidación o reducción. La catalasa como todas las enzimas tiene naturaleza proteica y por lo tanto es afectada por los mismos factores de desnaturalización y otras propiedades que afectan a las proteínas.
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