Demostracion De La Actividad Enzimatica Del Alfa Salival Y Sacarasa.

DEMOSTRACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DEL ALFA SALIVAL Y SACARASA.
I. JUSTIFICACÓN:

Se define la unidad de actividad enzimática (U) como la cantidad de enzima que cataliza la conversión de una cantidad de sustrato en un tiempo determinado.

La influencia de la concentración del sustrato (S), del enzima (E), el pH y la temperatura (T) en la cinética del enzima alfa-Amilasa salival en suacción sobre los enlaces alfa 1-4 del almidón. Para ello nos basaremos en la degradación del almidón en la unidad de tiempo mediante el seguimiento de la reacción de color que produce el mismo, así como sus productos de hidrólisis con el Iodo a través del reactivo de lugol.
La amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y cataliza la degradación del almidón, que es unpolisacárido de reserva vegetal. El almidón está formado por dos tipos de moléculas: la amilosa y la amilopectina. La amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la amilasa como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales y ramificadas (oligosacaridos) como productos.

II. OBJETIVOS: al término de la práctica estaré en condiciones de:

* Demostrar la actividad de la amilasa salival,determinando por la presencia del almidón no transformado (sustrato residual)

* Determinar las condiciones óptimas en las cuales la amilasa salival tiene su mayor actividad enzimática.

* Demostrar la desnaturalización de la enzima a través de altas temperaturas.

* Demostrar la acción catalítica de la enzima sacarasa sobre su sustrato específico que es lasacarosa


III. MATERIALES Y REACTIVOS:
MATERIALES | REACTIVOS |
* Tubos de ensayo | * Solución de almidón 1% |
* Pipetas | * Solución de cloruro de sodio al 8.5% |
* Gradillas | * Buffer fosfato pH = 6,6 |
* Frasco lavador | * Solución de lugol |
* Mechero de alcohol | * Solución de sacarosa 0,25m |
* Vasos de precipitación | * Agua destilada|
* Pinzas | * Solución salival |
* Trípode | * Buffer acetato pH 4,7 |
* Rejilla metálica | * Suspensión de levadura 10% |
| * Reactivo de Benedict |

IV. PROCEDIMIENTOS:

Preparación de solución de saliva. |
Se partió calentando agua a baño maría a 370 luego son esa agua se realizo gárgaras una compañera. |
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Preparaciónde almidón: |
1. Coger una cierta cantidad de almidón. | 2. Poner a calentar agua. | 3. Disolver el almidón en agua fría. |
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4. Incorporar el almidón disuelto al agua hirviendo durante un tiempo prudente. | 5. Retirarlo y esperar que enfrié. | |
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Preparación de suspensión de levadura 10% |
Se disolvió levadura en agua.|
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Demostración de la actividad del alfa amilasa salival. |
Incorporar buffer fosfato pH = 6,6 |
Tubo I | Tubo II | Tubo III | Tubo IV |
3mL | 3mL | 3mL | 3mL |
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Incorporar solución de NaCl al 8.5% |
Tubo I | Tubo II | Tubo III | Tubo IV |
1mL | 1mL | 1mL | -------------- |
| | | |Incorporar solución de alfa amilasa salival. |
Tubo I | Tubo II | Tubo III | Tubo IV |
-------------- | 1mL | 1mL | 1mL |
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Hervir por 10 minutos solo el tubo III |
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Incorporar solución de almidón al 1% |
Tubo I | Tubo II | Tubo III | Tubo IV |
5mL | 5mL | 5mL | 5mL |
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Incubar en baño maría por 30 minutos. |
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Extraer 1mL de cada tubo de ensayo.|
Tubo I | Tubo II | Tubo III | Tubo IV |
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Añadir solución de lugol |
Tubo I | Tubo II | Tubo III | Tubo IV |
0.5mL | 0.5mL | 0.5mL | 0.5mL |
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Llevar a fuego los tubos. |
Tubo I | Tubo II | Tubo III | Tubo IV |
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Demostración de la actividad catalítica de la sacarasa sobre la sacarosa. |
Colocar buffer acetato pH= 4,7 |
Tubo I | Tubo II |...