dengue

Organización Panamericana de la Salud
Oficina Regional de la
Organización Mundial de la Salud
División de Desarrollo de Sistemas y Servicios de Salud
Programa de Medicamentos Esenciales y Tecnología
Servicios de Laboratorios y Sangre
2002

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE TECNICAS
PARA EL DIAGNOSTICO DEL DENGUE
Dr. Angel Balmaseda Hechavarría
Centro Nacional de Diagnóstico y ReferenciaMinisterio de Salud. Republica de Nicaragua

Colaboradores:
Lic. Maria Luisa Matute
Laboratorios Secretaría de Salud
Honduras
Lic. Patricia Lissett Mira Gómez
Laboratorio Central
El Salvador

Programa de Reconstrucción Pos-Huracanes
George y Mitch

INDICE
INTRODUCCION

3

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

4

ELISA DE CAPTURA DE IGM

7

DETERMINACION DE IGG ( ELISA DE CAPTURA)14

ELISA DE INHIBICION

17

HEMAGLUTINACION E INHIBICION DE LA
HEMAGLUTINACION

21

TITULACION DEL VIRUS DEL DENGUE Y
NEUTRALIZACION POR REDUCCION DE PLACAS

27

AISLAMIENTO E IDENTIFICACION VIRAL

33

REVERSO TRANSCRIPCION- REACCION EN CADENA
DE LA POLIMERASA

39

PRODUCCION DE ANTIGENO POR METODO
SACAROSA ACETONA

62

PRODUCCION DE ANTIGENO CELULAR

65PREPARACION DE CONJUGADO ANTI DENGUE
PEROXIDASA

67

Referencias bibliográficas

71

2

INTRODUCCIÓN
Desde comienzo de la década de los 90 el Dengue se ha convertido en uno de
los mayores problemas de salud que enfrentan los países centroamericanos.
Anualmente miles de personas padecen de esta enfermedad y un número
significativo de ellas presentan las formas mas graves como son, laFiebre
hemorrágica del Dengue y síndrome de Shock, lo que ha llegado a ocasional
hasta la muerte de estas personas.
Esta situación que cada vez se hace mas crítica si se tiene en cuenta, que en
10 años han circulado los 4 serotipos del virus del Dengue en la región y los
índices de infestación se han mantenido en altos niveles y hasta se han
incrementado en varios lugares.
La amenaza delDengue no se debe, ni se puede enfrentar aisladamente en las
actuales condiciones mundiales. Los países centroamericanos deben actuar
conjuntamente y de manera coordinada para solucionar este problema. En el
caso especifico del diagnostico de laboratorio, se debe realizar una integración
de la metodología que se utiliza para de esa forma mejorar la calidad de los
resultados y dar respuestaoportuna ante una situación emergente. Las nuevas
tecnologías deben ser adquiridas de forma rápida y en conjunto, para lo cual
es necesario la capacitación constante de los recursos humanos de la región.
Esta guía de diagnostico, elaborada conjuntamente por los países del área y
coordinada por el laboratorio de Virología del Centro Nacional de Diagnostico y
Referencia del Ministerio de Salud deNicaragua, tiene como principal objetivo
estandarizar el diagnostico de laboratorio de Dengue, para que todos utilicemos
metodologías similares y tengamos un manual que nos oriente al momento de
realizar una técnica especifica.

3

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
En un laboratorio donde se trabaja con microorganismos patógenos o donde se
reciban muestras clínicas para realizar diagnósticode enfermedades
infecciosas la seguridad es significativamente importante. Cumplir con las
normas de bioseguridad es necesario para proteger la vida de los trabajadores
en un laboratorio, además de sus familiares, contactos y población en general.
También propicia la realización de las técnicas de la forma más eficiente y
correcta.
Cada laboratorio debe adaptar las normas y procedimientos deBioseguridad,
de acuerdo a sus condiciones. Estos procedimientos deben estar escritos y
colocados en un lugar visible. El personal del laboratorio debe conocer y
entender claramente todas estas normas y lo más importantes seguirlas en
cada momento. Una persona del laboratorio debe ser asignada para vigilar el
cumplimiento de las normas de bioseguridad y para dirigir las acciones a seguir...