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TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO

Análisis de proteínas
mediante electroforesis
e inmunotransferencia
(Western blot)
Alexandre de la Fuente González, Jesús Rodríguez
Lozano y Eduardo Fonseca Capdevila
Servicio de Dermatología. Complejo Hospitalario Universitario Juan Canalejo.
A Coruña. España.

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La química es unaciencia experimental y los químicos
que estudian los seres vivos, o cualquier investigador
que intente estudiar los organismos desde un punto de
vista químico, debe comenzar por estudiar los procesos
a escala celular y subcelular. Hay que tener en cuenta
que los resultados y las conclusiones correspondientes
a un trabajo sobre la materia viva deben relacionarse e
interpretarse a escala deórgano, tejido y, si es posible,
organismo, porque las células vivas están en un estado
dinámico de actividad y ésta puede influir no sólo en los
procesos químicos de las células más próximas (interacción celular), sino en la actividad de las más distantes
(efectos hormonales, citocinas, etc.).
La bioquímica, ciencia que estudia los seres vivos mediante procedimientos y métodos químicos, tuvoinicialmente un desarrollo muy lento. Por una parte, a los químicos del siglo XIX y principios del XX no les atraía
demasiado el aspecto coloidal y complejo que presentaba la materia viva a simple vista o mediante un microscopio óptico. Por otra parte, fue necesario esperar a que
diferentes ramas de la química alcanzaran un nivel tecnológico adecuado. Así, para conocer los metabolitos ydeterminar las concentraciones tan sumamente pequeñas en que estos compuestos se encuentran en las células, fue necesario esperar al desarrollo de la química
analítica. Hoy en día, para separar y purificar metabolitos necesitamos utilizar los métodos de centrifugación,
cromatografía y electroforesis; para determinar sus concentraciones, los de microanálisis; para caracterizarlos,
losespectrofotométricos (ultravioleta e infrarrojos);
para determinar una estructura en el espacio, los de difracción de rayos X, etc.
Correspondencia: Dr. A. de la Fuente González.
Servicio de Dermatología. CHU Juan Canalejo.
P.o Sir John Moore, s/n. 15006 A Coruña. España.
Correo electrónico: jlozano@mundo-r.com
Piel. 2007;22(5):252-8

Con el objeto de seguir un orden lógico en el estudio
de los procesosque tienen lugar en un sistema y la interrelación entre ellos, es conveniente comenzar por
estudiar las partes que componen dicho sistema. Esto requiere, generalmente, el aislamiento de los componentes
y un análisis que permita deducir su función o funciones
en el contexto del sistema. Cuando se requiere estudiar
los procesos que tienen lugar en una partícula u orgánulo de la célula, hay que,necesariamente, comenzar por
aislar dicho orgánulo o partícula. Esto puede conseguirse por un proceso de fraccionamiento de los componentes que implica dos etapas: una de disgregación o rotura
de las células y otra de centrifugación de la suspensión
celular resultante. La separación del componente celular que se desea estudiar del resto de los componentes
celulares requiere de la utilización detécnicas cromatográficas y electroforéticas. El conocimiento de la función de dicho componente celular se basa, entre otras,
en la información obtenida por la aplicación de técnicas
espectroscópicas, potenciométricas, polarográficas, manométricas y en la utilización de isótopos radiactivos.
Anteriormente hemos mencionado que el estudio de
la actividad celular requiere el fraccionamiento de loscomponentes celulares, pero debe tenerse en cuenta
que este proceso puede producir efectos diferentes de
los que tienen lugar en las células en condiciones normales. Con objeto de reducir al mínimo dichos efectos,
se debe tomar durante los experimentos todas las precauciones posibles, procurando mantener unas condiciones (soluciones reguladoras, pH, fuerza iónica, etc.)
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