desaminacion fenilalanina

Prueba de Fenil Alanina de Aminasa
María Fernanda Álvarez Ballesteros.
Ingeniería Ambiental
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Principio: Determinar la capacidad de un microorganismo para desaminar la fenilalanina aácido fenilpirúvico por vía enzimática, con la producción de acidez.
Esta actividad enzimática es característica del género Proteus, Morganella, Providencia y Rahnella.
Objetivo: Ayuda a ladiferenciación de especies:
Afipia felis (+) de A.
Broomeae (-) y A.
Clevelandencis (-).
Ejemplos de Enterobacteriaceae que exhiben la actividad de desaminasa.:
Raros aislamientos de enterobacter.(15)1. Pantoea agglomerans (+)
2. Rahmella aquatilis (+)
3.Tatumella ptyseos (+)
Bioquímica: El aminoácido aromático fenilalanina es desaminado por un mecanismo oxidativo por unaminoácido oxidasa. Una flavoproteína para producir un cetoácido , el ácido fenilpirúvico. La Desaminación oxidativa elimina el grupo amino (NH2) del aminoácido para formar un enlace doblea-cetoácido y amoniaco libre (NH3).Éste es un proceso de dos pasos:
Se elimina el hidrógeno, lo que produce un iminoácido y el hidrogeno que se combina con el oxigeno para formar agua; luego el iminoácidoes hidrolizado a un cetoácido, La fenilalanina es desaminada a ácido fenilpirúvico y con posterioridad puede ser reducida a ácido Fenil-láctico con una incubación adicional. El ácido Fenil-Láctico esreconvertido a fenilalanina y el ciclo de Desaminación ocurre de nuevo. Una pequeña cantidad de ácido fenilpirúvico puede ser descarboxilado a ácido fenilacético, el que también puede ser reconvertidoa fenilalanina.
Medio de Cultivo Empleado: Medio fenilalanina (PA):
Ingredientes. (PH 7.3)
Dl fenilalanina……………………..2g.
Extracto de levadura……………3g.
Cloruro de Sodio………………….5g.
Fosfatodisódico ( Na2HPO)….1g.
Agar……………………………………12g.
Agua desionizada………...1.000ml.
(el extracto de levadura contiene carbono y nitrógeno.)
Metodo de preparación:
Pesar la cantidad exacta que dice el...