Desarrollo De Electroforesis

Desarrollo de electroforesis:
Preparación del gel de agarosa:
Se necesita preparar 120 ml de gel de agarosa 0,8 %:
100 ml de sc --------------0,8 g de agarosa
120 ml de sc--------------0,96 g deagarosa
Llevar a 120 ml de TAE 1X; sc madre TAE 50X:
120 ml x 1/50= 2,4 ml
Se agrega bromuro de tilio;sc madre 10 mg/ml:
1 ml de sc---------10 mg de bromuro de etilio
120 ml de sc------- 12 mg de bromurode etidio.
Se colocan 0,96 g de agarosa.
Se lleva a 120 ml con TAE 1X
Se lleva a microondas hasta disolución
Se agrega 12 mg de bromuro de etidio
Se coloca el gel en el molde con el peine previamentecolocado y se deja enfriar
Se coloca el gel en cuba de electroforesis
Se lo cubre con TAE 1X (aprox.1 l):
1000 ml x 1/50= 20 ml
Se coloca 20 ml de TAE 50X y se lo lleva a 1000 ml con agua destiladaPreparación de la muestra:
Se coloca solución de DNA plasmídico (4 µl) en un tubo eppendorf.
Se le agrega buffer de siembra 3x (2 µl) y se lo mezcla.
Colocar las muestras en las calles de la cuba deelectroforesis.
Conectar la fuente para hacer correr las muestras hasta que el azul de bromo fenol haya migrado 10 cm.
Observar los resultados bajo la luz ultravioleta.

















Resultados:Después de hacer correr las muestras, se observaron los resultados bajo luz ultra violeta como se muestra en la figura 1.


Figura 1. Fotografía de electroforesis en gel de agarosa realizada en tp2. Sehan tomado las medidas de los marcadores de peso moleculares.






De acuerdo con las medidas tomadas de los marcadores de peso molecular, se creo una curva con los logaritmos de tamaños conocidos (pb)en función de la distancia recorrida.(fig.2)








Log (pm)








Distancia recorrida (cm)Figura 2. Curva de log (pm) vs. Distancia.
Habiendo obtenido este grafico anterior, se va a interpolar la movilidad del fragmento incógnita (marcado en fig.1), que...