“Desarrollo de un inoculante en un sistema aseptico a base de hongos micorrizicos”

“DESARROLLO DE UN INOCULANTE EN UN SISTEMA ASEPTICO A BASE DE HONGOS MICORRIZICOS”

INTRODUCCIÓN Los hongos micorrizicos arbusculares dependen de las fuentes de carbono proporcionadas por su planta hospedera para desarrollarse. Esta situación generó la necesidad de desarrollar sistemas en donde estos organismos pudieran crecer y completar su ciclo de vida. Los primeros intentos en este sentidofueron hechos por Mosse y Hepper (1975). Estos autores comenzaron a desarrollar un sistema simplificado "in vitro" y fue hasta poco más de una década después que se logró establecer dicho sistema utilizando raíces transformadas de zanahoria (Bécard y Fortin, 1988). Muchos intentos han sido realizados para lograr crecer los hongos micorrizicos arbusculares y los resultados indican que las esporasson la mejor fuente de inóculo en comparación de pequeños segmentos de raíces colonizadas y de segmentos de hifa (Bécard y Fortin, 1988). El sistema in vitro es la base para la producción a nivel industrial de inóculo aséptico (Declerck et al., 1996). Los mecanismos por los cuales se ha intentado promover la germinación de esporas obtenidas de ecosistemas no perturbados han sido variados, desdeexudados de raíz hasta adición de CO2 (Bécard et al., 1992). Sin embargo, el éxito hasta el momento ha sido no tan satisfactorio. Por lo que el presente reporte contiene los diferentes mecanismos propuestos para la promoción de la germinación de esporas nativas de hongos micorrizicos arbusculares y con ello lograr que estos organismos logren completar el ciclo de vida.

DESINFECCIÓN DE ESPORAS Laesterilización superficial de las esporas nativas, obtenidas de los sitios de muestreo y utilizadas para el establecimiento de los cultivos monospóricos, se realizó mediante el método propuesto por Bécard y Fortin (1988) con algunas modificaciones. Este método se detalla a continuación: 1.- Las esporas nativas fueron expuestas a cloramina T al 2 % durante 10 minutos. 2.- Después de transcurrido eltiempo en el paso 1 se enjuagaron perfectamente con agua destilada estéril cinco veces. 4.- Posterior al lavado, se expusieron las esporas a gentamicina (200 mg L-1) y bactrin (490 mg L-1) por un periodo de 10 minutos. 5.- Las esporas se lavaron con agua destilada estéril por cinco veces. 6.- Una vez lavadas las esporas, éstas se colocaron junto a la raíz transformada de zanahoria en cultivosmonospóricos.

ESTABLECIMIENTO DE CULTIVOS MONOSPÓRICOS in vitro El establecimiento de los cultivos monospóricos in vitro consistió en colocar pequeños segmentos de raíz no micorrizada de Zanahoria durante 15 días. Posteriormente las esporas nativas de hongos micorrizicos arbusculares por individual fueron colocadas en proximidad al ápice de la nueva raíz en cualquiera de los métodos empleados(Figura 2). Lo anterior en función de que en trabajos previos se ha propuesto que el inicio de la colonización micorrizica comienza en la zona cercana al ápice.

Figura 1.- Raíz de zanahoria colonizando. Esta nueva raíz fue utilizada para exponer la espora nativa de hongos micorrizicos arbusculares. RT = Nueva raíz de zanahoria; ERT = Explante de zanahoria.

Figura 2.- Espora de hongosmicorrizicos nativos en proximidad con el ápice de la raíz de zanahoria. EHM = Espora nativa del hongo micorrizico arbuscular; ART = Ápice de la raíz de zanahoria.

Las esporas nativas de hongos micorrizicos arbusculares obtenidas de las diferentes muestras se separaron por tamaño y estas esporas en un sistema in vitro fueron expuestas a materiales inertes a base de celulosa y proteínas en el medio decultivo con la finalidad de promover la germinación de las mismas. Otro ensayo implementado para la promoción de la germinación de esporas nativas de hongos micorrizicos arbusculares fue la utilización de esporas nodriza de Glomus intraradices. La germinación de esporas nativas de hongos micorrizicos arbusculares también fue promovida mediante herida física y química en proximidad del ápice de la...